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【求助/交流】GST标签蛋白纯化的问题
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| 本人最近在纯化一个蛋白（62kd），要求蛋白有活性，先将目的蛋白的基因连到了Pgex5-1的载体上，带GST纯化标签的载体，小量诱导成功，在大量收菌后，发现蛋白是在沉淀包涵体中的，着实郁闷了，不过还是按照分子克隆上的溶解包涵体的步骤将蛋白变成可溶的了。问题是在过GST的柱子之后跑胶发现蛋白基本上就没纯化到。刚开始以为是过柱子流速太快可能没挂住，之后将速度减低很多，结果还是不理想，我同时做的另一个蛋白（35kd）也是同样的方法纯化的就很好，重复做了几次都是这样，我很纳闷为什么这个蛋白就是纯化不到。各位高手指点一下吧！ |
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2楼2010-01-03 12:28:41
hihoney 
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3楼2010-01-04 11:59:58
jasco
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4楼2010-01-04 15:00:06
5楼2010-01-04 23:31:42
6楼2010-01-05 08:54:24
刘超_2009
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。弱问一下，构建表达载体以及优化表达条件时，怎样才能确保蛋白的可溶性表达呢？谢谢 7楼2010-01-05 10:36:41
snoopyzxx
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8楼2010-01-05 10:44:15