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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
runxiaoli(金币+2,VIP+0):非常感谢 12-15 11:40
runxiaoli(金币+1,VIP+0): 12-15 11:40
我觉得,既然你可以扩增出来其他基因的Poly A,而且你的中间片段也是从这个cDNA中扩增出来的,所以,你的cDNA应该是可以用的,没有必要再重新合成cDNA,毕竟试剂盒价格也是很可观的。19个碱基是可以进行pcr,但是在race里还是太短了,如果重新设计引物,增加引物长度,先设计两个引物就可以了,分别跟接头引物1,2做1st, 2edPCR,我觉得看那时候的结果如何吧,结果不好了也不用着急着和成新cDNA,再找找原因看。那个blast看特异性的方法很简单,把你的引物序列(每次一个)放到blastx就行了,看看检索出来的结果里有没有你要的基因,既然你扩增出来了其他基因,那么可能这些其他基因是在你的blastx结果里的。呵呵
11楼2009-12-15 11:23:09
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runxiaoli

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by hugang2004_2000 at 2009-12-15 11:23:
我觉得,既然你可以扩增出来其他基因的Poly A,而且你的中间片段也是从这个cDNA中扩增出来的,所以,你的cDNA应该是可以用的,没有必要再重新合成cDNA,毕竟试剂盒价格也是很可观的。19个碱基是可以进行pcr,但是在 ...

嗯,我会好好做的!谢谢您,有问题再向您请教,非常感激。
12楼2009-12-15 11:41:16
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)


runxiaoli(金币+1,VIP+0):非常感激。 12-15 19:49
补充一点点,做RACE的时候要注意扩增出来的片段大小,是不是和你预期的大小相似。UTR区域,大概加100个左右碱基吧。所以,你找到你的片段还有多长需要扩增,计算从引物到终止密码子的碱基数,加个50-100左右就是你应该得到的片段大小。如果得到了不同基因也要看看这个不是目的基因的基因是不是有用,毕竟得到一个新基因不容易,钱也花进去了,就要得到点结果的,多费点心思,不是坏事。在扩增中间片段的时候,即使得到的条带貌似一个单一条带,在链接到T载体后也要挑不同的克隆,用T载体通用引物做PCR看看,可能得到的条带会有点差别,这在克隆家族基因的isomer时有时会同时得到几个目的基因,这样的话,一下子得到好几个家族基因,对于后续实验质量,文章发表可以有质的提高。
13楼2009-12-15 12:36:00
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liyong1981

金虫 (正式写手)



runxiaoli(金币+1,VIP+0): 12-15 19:47
你们知不知道有个名词叫基因家族,还有个加同源序列。
建议:重新设计引物,你运气不好,第一次设计的引物正好中奖了
14楼2009-12-15 13:02:44
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hugang2004_2000

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-12-15 13:02:
你们知不知道有个名词叫基因家族,还有个加同源序列。
建议:重新设计引物,你运气不好,第一次设计的引物正好中奖了

两个黄鹂鸣翠柳,一行白鹭上青天。
15楼2009-12-15 13:26:06
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runxiaoli

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-12-15 13:02:
你们知不知道有个名词叫基因家族,还有个加同源序列。
建议:重新设计引物,你运气不好,第一次设计的引物正好中奖了

我设计了2次引物了,第一次得到的是另外一个基因家族的。第二次则是预测蛋白和其他不知道什么的基因。谢谢您的提醒,我会好好做的!
16楼2009-12-15 19:51:00
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