【求助/交流】被 real time-PCR折磨的孩子又来提问~ - 分子生物 - 综合其他

11楼2009-12-14 09:22:09

liyong1981

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关于二级结构的问题，我有些心得，可以站内讨论，有很多小trick

12楼2009-12-14 09:23:25

刘仕博

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哎呀，太好了，可算找到救命稻草了！！！
之前设计的引物总烦一些低级错误，链本身就有二级结构。
后来烦的错误稍微高级点，链间有二级结构，呵呵~
不知道这样的错误对real time影响有多大。
现在正打算提高2度试试看，不行我就买个飞机票回国了。
还有，刚才在网上搜索一些信息，发现有人说real time的退火要求至少要在60度，但也有人说要比引物的Tm值低个5度，我到底要听谁的呀？？？

生命在于折腾~

13楼2009-12-14 09:39:19

liyong1981

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

听谁的不重要，关键是自己做得出来就好，是把，你可以多设计几对引物，像简单的颈环结构啊，或者其他的啊，软件设计的时候会提示你的呀，其实呢，所谓的二级结构，我指的是合成好的，对实验影响不大，你干嘛直接就做定量呢，花钱哦。建议：送给公司做，这样很省事，花钱贵不了多少2.做Northern blot ,它的结果同样是paper所接受的，3.所谓的定量，也只是比半定量好些，结果不是真正意义上的定量，引物不要设计太长，有试几对，。

[ Last edited by liyong1981 on 2009-12-14 at 09:59 ]

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14楼2009-12-14 09:58:22

liyong1981

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楼主这名字，赞一个，又当官，又读博，厉害~~~

15楼2009-12-14 10:56:41

刘仕博

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引用回帖:

Originally posted by liyong1981 at 2009-12-14 09:58:
听谁的不重要，关键是自己做得出来就好，是把，你可以多设计几对引物，像简单的颈环结构啊，或者其他的啊，软件设计的时候会提示你的呀，其实呢，所谓的二级结构，我指的是合成好的，对实验影响不大，你干嘛直接就 ...

我现在是一天被韩国教授折磨着，他们的想法怪的很，宁愿让我一天自己瞎找引物，瞎找反应条件，也没说过送到哪个公司去做。而且我估计就我现在花的这钱，送到公司早就做完了，没准还有富余呢。对了，还不知道韩国有没有这样的公司呢，呵呵~
我也听说那个二级结构对实验的影响不太大，而且我觉得我的那个数据完全可以用的。不过据说发SCI的话这个引物扩增效率的数据也是要提供的。扔了那么银子，又不是我教授的什么项目，再不发个SCI出来，教授肯定不能让我毕业。
说实话，你说的很多专业名称我都看不太懂，因为不是科班出身，见笑。不过我觉得不知道该设定什么样的温度就是对整个实验原理不了解，这个应该是不容许的。
PS:也不知道我爸爸当时给我起名字的时候是怎么想的，可能就是为了别和别人重名吧，呵呵。我还真得找时间给我爸打个电话问下~

生命在于折腾~

16楼2009-12-14 11:21:51