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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这斑竹对MM很感兴趣啊?哈哈,都置顶了啊~~
11楼2009-12-14 09:22:09
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liyong1981

金虫 (正式写手)


关于二级结构的问题,我有些心得,可以站内讨论,有很多小trick
12楼2009-12-14 09:23:25
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刘仕博

金虫 (著名写手)

哎呀,太好了,可算找到救命稻草了!!!
之前设计的引物总烦一些低级错误,链本身就有二级结构。
后来烦的错误稍微高级点,链间有二级结构,呵呵~
不知道这样的错误对real time影响有多大。
现在正打算提高2度试试看,不行我就买个飞机票回国了。
还有,刚才在网上搜索一些信息,发现有人说real time的退火要求至少要在60度,但也有人说要比引物的Tm值低个5度,我到底要听谁的呀???
生命在于折腾~
13楼2009-12-14 09:39:19
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
听谁的不重要,关键是自己做得出来就好,是把,你可以多设计几对引物,像简单的颈环结构啊,或者其他的啊,软件设计的时候会提示你的呀,其实呢,所谓的二级结构,我指的是合成好的,对实验影响不大,你干嘛直接就做定量呢,花钱哦。建议:送给公司做,这样很省事,花钱贵不了多少2.做Northern blot ,它的结果同样是paper所接受的,3.所谓的定量,也只是比半定量好些,结果不是真正意义上的定量,引物不要设计太长,有试几对,。

[ Last edited by liyong1981 on 2009-12-14 at 09:59 ]
14楼2009-12-14 09:58:22
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liyong1981

金虫 (正式写手)


楼主这名字,赞一个,又当官,又读博,厉害~~~
15楼2009-12-14 10:56:41
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刘仕博

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-12-14 09:58:
听谁的不重要,关键是自己做得出来就好,是把,你可以多设计几对引物,像简单的颈环结构啊,或者其他的啊,软件设计的时候会提示你的呀,其实呢,所谓的二级结构,我指的是合成好的,对实验影响不大,你干嘛直接就 ...

我现在是一天被韩国教授折磨着,他们的想法怪的很,宁愿让我一天自己瞎找引物,瞎找反应条件,也没说过送到哪个公司去做。而且我估计就我现在花的这钱,送到公司早就做完了,没准还有富余呢。对了,还不知道韩国有没有这样的公司呢,呵呵~
我也听说那个二级结构对实验的影响不太大,而且我觉得我的那个数据完全可以用的。不过据说发SCI的话这个引物扩增效率的数据也是要提供的。扔了那么银子,又不是我教授的什么项目,再不发个SCI出来,教授肯定不能让我毕业。
说实话,你说的很多专业名称我都看不太懂,因为不是科班出身,见笑。不过我觉得不知道该设定什么样的温度就是对整个实验原理不了解,这个应该是不容许的。
PS:也不知道我爸爸当时给我起名字的时候是怎么想的,可能就是为了别和别人重名吧,呵呵。我还真得找时间给我爸打个电话问下~
生命在于折腾~
16楼2009-12-14 11:21:51
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
拿国内来做,不难的,韩国人有点神经质~
17楼2009-12-14 11:34:47
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地图蜗牛

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有没有调整引物浓度?50-500(还有人建议50-900)uM,相互两两组合。

温度的问题,象前面一位虫友说的,适合你的才是正确的。
18楼2009-12-14 12:04:22
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刘仕博

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-12-14 11:34:
拿国内来做,不难的,韩国人有点神经质~

我的学位都得韩国人发呢,拿回来不现实,总不能自己买单吧,呵呵~
这样也挺好,学的不少东西。等以后回国接着研究的时候也能给国内省不少银子不是。
拿韩国人的钱练手算我赚的~
生命在于折腾~
19楼2009-12-14 12:21:13
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刘仕博

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 地图蜗牛 at 2009-12-14 12:04:
有没有调整引物浓度?50-500(还有人建议50-900)uM,相互两两组合。

温度的问题,象前面一位虫友说的,适合你的才是正确的。

引物的浓度应该是没有问题吧,现在就差温度了,今天弄最后一次,不行我就打算重新找个引物了,和做实验比起来,换引物还是比较经济的,呵呵 ~
生命在于折腾~
20楼2009-12-14 12:23:23
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