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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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刘仕博

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】被 real time-PCR折磨的孩子又来提问~

不好意思又来麻烦大家,不过还是厚着脸皮发个小贴~
最近我买了新的引物。像之前哪位高手建议过的,我先做了次PCR,觉得引物没有问题,就直接用real time-PCR做了primer test。
什么都可以就是扩增效率不够,在70-80%。引物的Tm值在64度左右,所以我设置的退火温度是58度。
如果想提高扩增效率我该怎么做呢?增加模板的浓度?改变退火温度?
感激不尽!
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生命在于折腾~
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liyong1981

金虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这斑竹对MM很感兴趣啊?哈哈,都置顶了啊~~
11楼2009-12-14 09:22:09
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刘仕博

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by j2 at 2009-12-10 12:57:
增加循环数

先谢啦~
不过我已经设置到44个循环了,估计也不能再多了。
我增加了模板的浓度,不知道能不能 行~
生命在于折腾~
3楼2009-12-10 13:11:30
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qqsvery

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 12-11 12:31
是不是荧光探针的问题呢?各引物的浓度与探针的浓度比例等等。。。
谎言和真实在河边洗澡,谎言先洗好,穿走了真实的衣服,真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言,却很难接受赤裸裸的真实。
4楼2009-12-10 13:59:04
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刘仕博

金虫 (著名写手)

我试了几个浓度了,还是不行。
我师姐说是我的模板不行,据说引物找的也不太好,不过我个人觉得引物还是可以用的。我打算从cDNA开始重新弄~
生命在于折腾~
5楼2009-12-10 17:06:03
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