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刘仕博

金虫 (著名写手)

应助: 2 (幼儿园)
贵宾: 0.203
金币: 1435.9
散金: 2
红花: 2
帖子: 1321
在线: 182.8小时
虫号: 797250
注册: 2009-06-23
性别: MM
专业: 环境工程

[交流] 【求助/交流】被 real time-PCR折磨的孩子又来提问~

不好意思又来麻烦大家，不过还是厚着脸皮发个小贴~
最近我买了新的引物。像之前哪位高手建议过的，我先做了次PCR，觉得引物没有问题，就直接用real time-PCR做了primer test。
什么都可以就是扩增效率不够，在70-80%。引物的Tm值在64度左右，所以我设置的退火温度是58度。
如果想提高扩增效率我该怎么做呢？增加模板的浓度？改变退火温度？
感激不尽！

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生命在于折腾~

1楼2009-12-10 10:52:05

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liyong1981

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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散金: 116
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虫号: 357405
注册: 2007-04-27
性别: GG
专业: antibody

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

听谁的不重要，关键是自己做得出来就好，是把，你可以多设计几对引物，像简单的颈环结构啊，或者其他的啊，软件设计的时候会提示你的呀，其实呢，所谓的二级结构，我指的是合成好的，对实验影响不大，你干嘛直接就做定量呢，花钱哦。建议：送给公司做，这样很省事，花钱贵不了多少2.做Northern blot ,它的结果同样是paper所接受的，3.所谓的定量，也只是比半定量好些，结果不是真正意义上的定量，引物不要设计太长，有试几对，。