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刘仕博

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[交流] 【求助/交流】被 real time-PCR折磨的孩子又来提问~

不好意思又来麻烦大家，不过还是厚着脸皮发个小贴~
最近我买了新的引物。像之前哪位高手建议过的，我先做了次PCR，觉得引物没有问题，就直接用real time-PCR做了primer test。
什么都可以就是扩增效率不够，在70-80%。引物的Tm值在64度左右，所以我设置的退火温度是58度。
如果想提高扩增效率我该怎么做呢？增加模板的浓度？改变退火温度？
感激不尽！

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生命在于折腾~

1楼2009-12-10 10:52:05

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刘仕博

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引用回帖:

Originally posted by liyong1981 at 2009-12-14 09:58:
听谁的不重要，关键是自己做得出来就好，是把，你可以多设计几对引物，像简单的颈环结构啊，或者其他的啊，软件设计的时候会提示你的呀，其实呢，所谓的二级结构，我指的是合成好的，对实验影响不大，你干嘛直接就 ...

我现在是一天被韩国教授折磨着，他们的想法怪的很，宁愿让我一天自己瞎找引物，瞎找反应条件，也没说过送到哪个公司去做。而且我估计就我现在花的这钱，送到公司早就做完了，没准还有富余呢。对了，还不知道韩国有没有这样的公司呢，呵呵~
我也听说那个二级结构对实验的影响不太大，而且我觉得我的那个数据完全可以用的。不过据说发SCI的话这个引物扩增效率的数据也是要提供的。扔了那么银子，又不是我教授的什么项目，再不发个SCI出来，教授肯定不能让我毕业。
说实话，你说的很多专业名称我都看不太懂，因为不是科班出身，见笑。不过我觉得不知道该设定什么样的温度就是对整个实验原理不了解，这个应该是不容许的。
PS:也不知道我爸爸当时给我起名字的时候是怎么想的，可能就是为了别和别人重名吧，呵呵。我还真得找时间给我爸打个电话问下~