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汕头大学海洋科学接受调剂
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jlzkchong

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】双酶切的两个酶最适反映温度不一样怎么办?

请教虫友,最近我在做质粒的双酶切,其中用到两组酶,BamHI+SalI和ClaI+SalI分别进行双酶切,酶均购自TAKARA公司,通过产品目录查询,发现两组酶中的两个酶的最适温度都是一个30度,一个37度,我开始没发现这个问题,混合后直接放到37度酶切,结果发现质粒似乎只被单酶切了,没有切下目的小条带,请问各位虫友有没有解决类似问题的好方法,在此谢过了!
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tianpingpe

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
选择酶切效率都比较高的buffer,先在30度反应2hr,然后在37度反应,一般都没有太大问题。片段小的话,就多酶切几个体系,在一个孔电泳,保证量和酶切效率
4楼2009-12-08 09:39:58
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1、先用30度的酶单酶切,回收换Buffer加和酶再37度酶切。但是还要回收,酶切的质粒可能有损失。
2、也可以30度切一段时间后再放到37度切。这样比较省事,但是有时候酶可能切的不完全。
3、也有可能你的质粒已经切开了,但是你跑电泳的时间较长,导致小片段看不见了,因为小片段结合的EB肯定少,一般比较暗。
2楼2009-12-07 22:36:55
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qiang84zhang

银虫 (正式写手)

建议用楼上的第一种方法,我们都是这么做的
3楼2009-12-08 09:39:25
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最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

严于律己,宽以待人
5楼2009-12-08 10:02:10
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