24小时热门版块排行榜    

查看: 3107  |  回复: 5
当前主题已经存档。

jlzkchong

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】双酶切的两个酶最适反映温度不一样怎么办?

请教虫友,最近我在做质粒的双酶切,其中用到两组酶,BamHI+SalI和ClaI+SalI分别进行双酶切,酶均购自TAKARA公司,通过产品目录查询,发现两组酶中的两个酶的最适温度都是一个30度,一个37度,我开始没发现这个问题,混合后直接放到37度酶切,结果发现质粒似乎只被单酶切了,没有切下目的小条带,请问各位虫友有没有解决类似问题的好方法,在此谢过了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1、先用30度的酶单酶切,回收换Buffer加和酶再37度酶切。但是还要回收,酶切的质粒可能有损失。
2、也可以30度切一段时间后再放到37度切。这样比较省事,但是有时候酶可能切的不完全。
3、也有可能你的质粒已经切开了,但是你跑电泳的时间较长,导致小片段看不见了,因为小片段结合的EB肯定少,一般比较暗。
2楼2009-12-07 22:36:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qiang84zhang

银虫 (正式写手)

建议用楼上的第一种方法,我们都是这么做的
3楼2009-12-08 09:39:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianpingpe

新虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
选择酶切效率都比较高的buffer,先在30度反应2hr,然后在37度反应,一般都没有太大问题。片段小的话,就多酶切几个体系,在一个孔电泳,保证量和酶切效率
4楼2009-12-08 09:39:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最爱花诗雨

金虫 (正式写手)

穷鬼

严于律己,宽以待人
5楼2009-12-08 10:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jlzkchong

新虫 (初入文坛)

谢谢

谢谢楼上几位虫友的解答,我想问问你们都用什么胶回收的试剂盒?!一般回收完了你们是否测过回收以后的浓度?!效率高不高?推荐一下比较好用的胶回收试剂盒吧~!
6楼2009-12-08 18:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jlzkchong 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 310求调剂 +4 baibai1314 2026-03-16 4/200 2026-03-22 20:19 by edmund7
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 284求调剂 +5 Zhao anqi 2026-03-22 5/250 2026-03-22 17:38 by barlinike
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 17/850 2026-03-22 15:18 by 脱颖而出
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 346求调剂[0856] +4 WayneLim327 2026-03-16 7/350 2026-03-21 04:02 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸! 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林,给自己招师弟中~ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
信息提示
请填处理意见