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jlzkchong

新虫 (初入文坛)

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[交流] 【求助/交流】双酶切的两个酶最适反映温度不一样怎么办？

请教虫友，最近我在做质粒的双酶切，其中用到两组酶，BamHI+SalI和ClaI+SalI分别进行双酶切，酶均购自TAKARA公司，通过产品目录查询，发现两组酶中的两个酶的最适温度都是一个30度，一个37度，我开始没发现这个问题，混合后直接放到37度酶切，结果发现质粒似乎只被单酶切了，没有切下目的小条带，请问各位虫友有没有解决类似问题的好方法，在此谢过了！

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1楼 2009-12-07 21:56:45

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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

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1、先用30度的酶单酶切，回收换Buffer加和酶再37度酶切。但是还要回收，酶切的质粒可能有损失。
2、也可以30度切一段时间后再放到37度切。这样比较省事，但是有时候酶可能切的不完全。
3、也有可能你的质粒已经切开了，但是你跑电泳的时间较长，导致小片段看不见了，因为小片段结合的EB肯定少，一般比较暗。