应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求救PCR高手
81/1返回列表
查看: 776  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

axiaoru

[交流] 【求助/交流】求救PCR高手

我提的总RNA质量很好，可是按照说明书做反转录和简并引物PCR好多次，一条带都没出来过，会是什么原因呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-12-07 12:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianpingpe

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0): 12-7 13:00
1.检查你的简并引物设计是否合理，重新设计简并引物
2.降低rna的量，模板量太高有的时候也扩增不出来。
3.检查rna是否有部分降解
赞一下(21人) 回复此楼
2楼2009-12-07 12:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你好
可能原因：
1.反转录的时候出问题了，也就是你合成CDNA第一链的时候，反转录效率不高，或者说不完全，反转的杂片段多
2.既然说了你的RNA质量不错，那RNA应该不会降解!
3.你不是有EST的序列么？设计个特异的引物看看，跑得出来不
4.PCR的时候注意跑TD，这个是关键
希望对你有帮助~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-12-07 13:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swellow

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计还是因为设计的问题，注意选择保守区进行设计
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-12-07 16:07:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高海洁

新虫 (初入文坛)
长见识的
回复此楼
5楼2009-12-07 16:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1，用内参（如beta actin）检测反转录的效果。
2，如引物兼并碱基较多，建议采用高纯度的合成方法。
3，如目的基因GC含量高，PCR时加二甲基亚砜至终浓度10％。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-12-07 17:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

axiaoru

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-12-7 13:16:
你好
可能原因：
1.反转录的时候出问题了，也就是你合成CDNA第一链的时候，反转录效率不高，或者说不完全，反转的杂片段多
2.既然说了你的RNA质量不错，那RNA应该不会降解!
3.你不是有EST的序列么？设计个特异 ...

多谢指教！引物不会有问题，因为两个月前有人用它扩出来了。第一条可能是我的问题。
赞一下 回复此楼
7楼2009-12-08 14:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

axiaoru

引用回帖:
Originally posted by won7 at 2009-12-7 17:13:
1，用内参（如beta actin）检测反转录的效果。
2，如引物兼并碱基较多，建议采用高纯度的合成方法。
3，如目的基因GC含量高，PCR时加二甲基亚砜至终浓度10％。

多谢了，您提的都是很细致的问题。
赞一下 回复此楼
8楼2009-12-08 14:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 axiaoru 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290求调剂 +5 柯淮然 2026-04-12 7/350 2026-04-12 05:04 by labixiaoqiao
[考研] 291分调剂 +5 上岸小莹加油 2026-04-09 6/300 2026-04-11 21:06 by 逆水乘风
[考研] 283求调剂 086004考英二数二 +17 那个噜子 2026-04-10 18/900 2026-04-11 16:27 by 明月此时有
[考研] 288求调剂 +15 代fish 2026-04-09 16/800 2026-04-11 10:26 by wwj2530616
[考研] 机械专硕270求调剂，接受跨专业 +12 老师看看我吧aba 2026-04-09 14/700 2026-04-11 10:21 by laoshidan
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +8 求上岸的小王 2026-04-10 8/400 2026-04-10 15:09 by hemengdong
[考博] 博士自荐 +7 可可小胖 2026-04-08 7/350 2026-04-10 08:28 by kimhero
[考研] 085600材料与化工，求调剂 +11 won_qii 2026-04-07 11/550 2026-04-09 17:03 by luoyongfeng
[考研] 085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 材料工程322 +18 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 19/950 2026-04-09 10:44 by cymywx
[考研] 求助071001调剂！！！ +7 黄守松 2026-04-05 8/400 2026-04-09 09:07 by 徐良白眉大侠
[考研] 085404，334分，求调剂 +5 sunjie8888 2026-04-08 8/400 2026-04-09 07:26 by sunjie8888
[考研] 考研求调剂 +4 雯??? 2026-04-08 4/200 2026-04-08 21:44 by 土木硕士招生
[考研] 材料科学与工程320求调剂，080500 +12 黄瓜味薯片 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:26 by luoyongfeng
[考研] 316求调剂 +4 15318418673 2026-04-07 4/200 2026-04-07 22:12 by hemengdong
[考研] 一志愿南科大生物学297分，求调剂推荐 +8 Y-yyusx 2026-04-06 9/450 2026-04-07 19:38 by biomichael
[考研] 318求调剂 +5 李青山山山 2026-04-07 5/250 2026-04-07 18:24 by 蓝云思雨
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] （调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭