应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求救PCR高手
81/1返回列表
查看: 757  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

axiaoru

[交流] 【求助/交流】求救PCR高手

我提的总RNA质量很好，可是按照说明书做反转录和简并引物PCR好多次，一条带都没出来过，会是什么原因呢？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-12-07 12:52:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tianpingpe

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0): 12-7 13:00
1.检查你的简并引物设计是否合理，重新设计简并引物
2.降低rna的量，模板量太高有的时候也扩增不出来。
3.检查rna是否有部分降解
赞一下(21人) 回复此楼
2楼2009-12-07 12:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyong1981

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你好
可能原因：
1.反转录的时候出问题了，也就是你合成CDNA第一链的时候，反转录效率不高，或者说不完全，反转的杂片段多
2.既然说了你的RNA质量不错，那RNA应该不会降解!
3.你不是有EST的序列么？设计个特异的引物看看，跑得出来不
4.PCR的时候注意跑TD，这个是关键
希望对你有帮助~
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2009-12-07 13:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swellow

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计还是因为设计的问题，注意选择保守区进行设计
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-12-07 16:07:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

高海洁

新虫 (初入文坛)
长见识的
回复此楼
5楼2009-12-07 16:58:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

won7

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1，用内参（如beta actin）检测反转录的效果。
2，如引物兼并碱基较多，建议采用高纯度的合成方法。
3，如目的基因GC含量高，PCR时加二甲基亚砜至终浓度10％。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-12-07 17:13:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

axiaoru

引用回帖:
Originally posted by liyong1981 at 2009-12-7 13:16:
你好
可能原因：
1.反转录的时候出问题了，也就是你合成CDNA第一链的时候，反转录效率不高，或者说不完全，反转的杂片段多
2.既然说了你的RNA质量不错，那RNA应该不会降解!
3.你不是有EST的序列么？设计个特异 ...

多谢指教！引物不会有问题，因为两个月前有人用它扩出来了。第一条可能是我的问题。
赞一下 回复此楼
7楼2009-12-08 14:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

axiaoru

引用回帖:
Originally posted by won7 at 2009-12-7 17:13:
1，用内参（如beta actin）检测反转录的效果。
2，如引物兼并碱基较多，建议采用高纯度的合成方法。
3，如目的基因GC含量高，PCR时加二甲基亚砜至终浓度10％。

多谢了，您提的都是很细致的问题。
赞一下 回复此楼
8楼2009-12-08 14:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 axiaoru 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 3/150 2026-03-15 17:32 by 小物理化学
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 313分生物学求调剂 +6 Yyt杨1 2026-03-09 8/400 2026-03-14 03:00 by JourneyLucky
[考研] 化学工程321分求调剂（南京工业，浙江工业） +3 大米饭！ 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:34 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 泣血叩求调剂恩，愿以丹心报师恩 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:18 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭