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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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heyugudu

银虫 (正式写手)


[资源] 【原创】关于HPLC仪器使用上的问题

最近用HPLC做的样,同一样品出峰面积相差很大,分析了很多原因,与大家一起分享一下。
1、进样器稳定性
进样器的稳定性偏差不能过大,用纯水走针后计算一下正负偏差都小于5%,所以排除了进样器的问题。
2、色谱柱
为了避免色谱柱出现问题,连续走了五天,换了五根柱子,出现的问题基本一致,应该不是柱子的问题。
3、流动相
因为使用的流动相用三乙胺调了PH,可能有部分盐析出,影响流动相的稳定性。
其次就是脱气,由于没有使用脱气机,脱气效果明显变差,有可能气泡进入柱子引起基线漂移,同时使柱压不稳。
现有条件下为了改善这种现象,应将流动相等放在仪器最上面,使气泡不容易进入泵,即使有小气泡,也会因为高度而飘浮回瓶内。流动相超声时间应延长。排气时应该观察是否排净。且配制流动相时一定要抽滤,可以使溶氧量降低,不易产生气泡。避免出现鬼峰。

以上是自己的一点经验。请大家多多指教。

本帖关键词:HPLC 气泡 基线 进样器 气机

[ Last edited by kidant on 2010-2-13 at 14:51 ]
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canwor

银虫 (正式写手)


★★★ 三星级,支持鼓励

好不容易坐个沙发
2楼2009-12-02 18:43:09
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heyugudu

银虫 (正式写手)


感动哦,这是我第一次发帖,谢谢你
3楼2009-12-02 19:03:48
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zxcd88

铁杆木虫 (正式写手)


★★★ 三星级,支持鼓励

鼓励一下
4楼2009-12-03 22:43:29
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Frenkie_2001

木虫 (著名写手)


★ 一星级,一般


笨笨猪0608(金币+1,VIP+0):不排除脱气机会坏,我以前实验室的就坏了,很崩溃 12-4 08:11
HPLC仪器现在都有了脱气机了吧
5楼2009-12-04 00:14:32
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wangcaihao

木虫 (正式写手)



笨笨猪0608(金币+1,VIP+0):谢谢参与交流! 12-4 10:00
看看同一根柱子多次进样出峰时间是否稳定,看看每个峰的峰型是否正常不是矮胖的类型吧。
6楼2009-12-04 08:44:21
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heyugudu

银虫 (正式写手)


★ ★
duandian123(金币+2,VIP+0):谢谢参与! 12-5 08:47
引用回帖:
Originally posted by wangcaihao at 2009-12-4 08:44:
看看同一根柱子多次进样出峰时间是否稳定,看看每个峰的峰型是否正常不是矮胖的类型吧。

峰形大多数时候与流动相有关,当然也不排除柱子的损坏情况,而样品的保留时间,要看你进样时的柱压是否稳定,流动相的酸碱度等不同的原因,与峰的高矮胖瘦关系并不大。
7楼2009-12-04 18:22:53
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heyugudu

银虫 (正式写手)


我们的岛津液相就没有脱气机,买的年头多了,当时也没有考虑脱气的问题,我看见好多帖子上都在问一些关于HPLC的基本问题,所以才想起来要谈谈这些
8楼2009-12-04 18:25:04
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xingchen8333

铁虫 (小有名气)


★★★ 三星级,支持鼓励

谢谢!
9楼2010-02-11 18:37:54
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ppt123

铜虫 (初入文坛)


★★★ 三星级,支持鼓励


junjun517(金币+1):谢谢参与 2010-03-24 11:16
仪器的基本要求要达到,比如楼上说的脱气,比如色谱柱的PH值可用范围,否则花了很大的力气去探求原因,实在是得不偿失,费力不讨好的事情
10楼2010-02-12 20:55:16
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hjw123

铜虫 (正式写手)


★★★ 三星级,支持鼓励

你是什么厂家的液相?一般情况都有在线脱气功能的。
11楼2010-03-08 00:06:06
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shelinli

木虫 (正式写手)


★★★ 三星级,支持鼓励

(花了很大的力气去探求原因,实在是得不偿失,费力不讨好的事情 )
我现用的岛津液相,第一次进样的时候基线平稳,到第二次或第三次的时候基线就有些漂移了?
12楼2010-03-08 09:12:54
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章鱼_zy

铁虫 (初入文坛)


★★★ 三星级,支持鼓励

我也经常遇到这样的问题,我觉得还有一个原因就是样品问题,如果样品本身不稳定或者溶解性有问题,应该也有这种可能,不知道大家的意见如何
13楼2010-03-08 21:25:22
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mamx591

铁杆木虫 (正式写手)


进来学习的
14楼2010-03-10 11:09:00
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chchzh

新虫 (小有名气)



junjun517(金币+1):谢谢参与 2010-03-24 11:17
因为使用的流动相用三乙胺调了PH,据我所知三乙胺会引起基线漂移
15楼2010-03-12 12:18:23
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mengxiangpp

木虫 (职业作家)


★★★★★ 五星级,优秀推荐

支持这样的原创
16楼2010-03-12 15:32:07
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宋远涛

铁杆木虫 (著名写手)


★★★★★ 五星级,优秀推荐


junjun517(金币+1):谢谢参与 2010-03-24 11:17
可以尝试买一瓶氦气来脱气,效果很好的。。WATERS-2695就是氦气在线脱气的。。上述还有一种情况是氘灯的问题。。。
17楼2010-03-13 00:24:56
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hero_jer

木虫 (小有名气)


★★★ 三星级,支持鼓励


junjun517(金币+1):谢谢参与 2010-03-24 11:17
还有柱温也得注意,柱温没稳定的时候会直接影响出峰时间,出峰时间相差太大,峰面积也会有很大误差的
18楼2010-03-13 09:37:30
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知识浩海

银虫 (小有名气)


★★★ 三星级,支持鼓励

??...
19楼2010-03-24 11:13:27
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雨后

铜虫 (小有名气)


★★★ 三星级,支持鼓励

我也遇到过这样的问题,内标峰面积很稳定,主成分峰忽大忽小,但保留时间很稳定,我认为是我的样品分布不均造成的,混匀了还是有同样的问题,郁闷
20楼2010-03-24 21:27:03
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琼5769

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by 雨后 at 2010-03-24 21:27:03:
我也遇到过这样的问题,内标峰面积很稳定,主成分峰忽大忽小,但保留时间很稳定,我认为是我的样品分布不均造成的,混匀了还是有同样的问题,郁闷

我也遇到过这样的事,到现在还不知道为什么哎,期待
21楼2010-03-24 22:08:33
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heyugudu

银虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by chchzh at 2010-03-12 12:18:23:
因为使用的流动相用三乙胺调了PH,据我所知三乙胺会引起基线漂移

气泡也可以引起基线漂移的情况,如果漂起来的基线不能回复原来的高度,一般都是进入了气泡引起的
22楼2010-04-02 13:15:06
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heyugudu

银虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by 雨后 at 2010-03-24 21:27:03:
我也遇到过这样的问题,内标峰面积很稳定,主成分峰忽大忽小,但保留时间很稳定,我认为是我的样品分布不均造成的,混匀了还是有同样的问题,郁闷

我也遇到过一次这种情况,通过试验摸索,认为是我们溶解样品的溶剂(95%乙醇)引起的,更换溶剂后效果就好了,很难解释个中原因。
23楼2010-04-02 13:19:16
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