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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 质量控制 » 【原创】关于HPLC仪器使用上的问题
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heyugudu

银虫 (正式写手)

[资源] 【原创】关于HPLC仪器使用上的问题

最近用HPLC做的样，同一样品出峰面积相差很大，分析了很多原因，与大家一起分享一下。
1、进样器稳定性
进样器的稳定性偏差不能过大，用纯水走针后计算一下正负偏差都小于5%，所以排除了进样器的问题。
2、色谱柱
为了避免色谱柱出现问题，连续走了五天，换了五根柱子，出现的问题基本一致，应该不是柱子的问题。
3、流动相
因为使用的流动相用三乙胺调了PH，可能有部分盐析出，影响流动相的稳定性。
其次就是脱气，由于没有使用脱气机，脱气效果明显变差，有可能气泡进入柱子引起基线漂移，同时使柱压不稳。
现有条件下为了改善这种现象，应将流动相等放在仪器最上面，使气泡不容易进入泵，即使有小气泡，也会因为高度而飘浮回瓶内。流动相超声时间应延长。排气时应该观察是否排净。且配制流动相时一定要抽滤，可以使溶氧量降低，不易产生气泡。避免出现鬼峰。

以上是自己的一点经验。请大家多多指教。

本帖关键词：HPLC 气泡 基线 进样器 气机

[ Last edited by kidant on 2010-2-13 at 14:51 ]
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1楼 2009-12-02 15:54:21
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heyugudu

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 雨后 at 2010-03-24 21:27:03:
我也遇到过这样的问题,内标峰面积很稳定,主成分峰忽大忽小,但保留时间很稳定,我认为是我的样品分布不均造成的,混匀了还是有同样的问题,郁闷

我也遇到过一次这种情况，通过试验摸索，认为是我们溶解样品的溶剂（95%乙醇）引起的，更换溶剂后效果就好了，很难解释个中原因。
赞一下 回复此楼
23楼2010-04-02 13:19:16
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canwor

银虫 (正式写手)

★★★ 三星级,支持鼓励

好不容易坐个沙发
赞一下 回复此楼
2楼2009-12-02 18:43:09
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heyugudu

银虫 (正式写手)
感动哦，这是我第一次发帖，谢谢你
赞一下 回复此楼
3楼2009-12-02 19:03:48
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Frenkie_2001

木虫 (著名写手)

★ 一星级,一般

★
笨笨猪0608(金币+1,VIP+0):不排除脱气机会坏，我以前实验室的就坏了，很崩溃 12-4 08:11
HPLC仪器现在都有了脱气机了吧
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2009-12-04 00:14:32
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