24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 807  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 请教各位大侠有关PCR的问题

为什么我的基因(约2kb)PCR用EasyTaq酶(Transgen公司)能扩增出来,而用pfu酶却无法扩增,换了个公司的pfu酶也不行,不知道是哪里出问题了,请各位帮忙?

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-27 at 13:27 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yunaitong

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
EasyTaq酶(Transgen公司)本身有一条带
他是酒精或其他什么东西
你在凝胶成像系统看看,他是红色的带
不是你的目的带~~~
所以其他酶没扩出来正常
9楼2009-11-27 10:01:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

09021122

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢交流 11-26 18:25
长度在2KB左右,一般用高保真的酶是可以扩出来的,除非有以下几点原因:
1:操作上的不规范。如果操作不是很细心的话,很容易扩不出来。
2:酶的失活。如果你的taq酶本身就是失效的,根本就扩不出来。
3:用pfu酶时,退火温度是否有变化呢?如果对退火温度要求有变化的话,而你又没有调的话,也是扩不出来的。
4:应该是原材料的保证。如果全基因组有问题的话,当然是扩不出来的。
雄关漫道真如铁,而今迈步从头越
2楼2009-11-26 13:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangqihong

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 09021122 at 2009-11-26 13:39:
长度在2KB左右,一般用高保真的酶是可以扩出来的,除非有以下几点原因:
1:操作上的不规范。如果操作不是很细心的话,很容易扩不出来。
2:酶的失活。如果你的taq酶本身就是失效的,根本就扩不出来。
3:用pf ...

因为用Taq酶就能扩出来,应该不是操作或是基因组的问题,而且pfu酶又是买的新的,Takara的,酶应该不会失活。我也做梯度了,就是没有扩出来,找不到原因。
3楼2009-11-26 14:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+1,VIP+0):有道理 11-26 18:25
也有可能 是基因组空间构型的问题吧!高保真的酶比起Taq来更难以结合些。
4楼2009-11-26 15:44:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程085601,270求调剂 +35 @ASDF1234 2026-04-08 37/1850 2026-04-13 01:18 by 幸免 ..
[考研] 279求调剂 +9 张番茄不炒蛋 2026-04-11 9/450 2026-04-12 22:22 by paopaotu326
[考研] 复试调剂 +14 积极向上; 2026-04-10 16/800 2026-04-12 20:02 by gruyclewee
[考研] 313求调剂 +5 余摆摆是大哥 2026-04-11 5/250 2026-04-12 10:34 by 猪会飞
[考研] 化学工程调剂289 +44 yang婷 2026-04-07 50/2500 2026-04-12 02:36 by 秋豆菜芽
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂,一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 一志愿985机械学硕380求调剂 +5 关关雎鸠10 2026-04-11 5/250 2026-04-11 10:10 by 知念。A
[考研] 289 分105500药学专硕求调剂(找B区学校) +6 白云123456789 2026-04-09 8/400 2026-04-10 21:13 by zhouxiaoyu
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 282,电气工程专业,求调剂,不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 347材料专硕求调剂 +19 zj8215216 2026-04-06 19/950 2026-04-10 09:36 by 690616278
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
[考研] 生物学调剂,一志愿西南大学348,Top期刊一区二作、二区三作,三等奖学金三次 +4 candyyyi 2026-04-09 4/200 2026-04-09 18:39 by l_paradox
[考研] 材料调剂 +10 18815505510 2026-04-09 11/550 2026-04-09 17:07 by 544594351
[考研] 286求调剂 +19 Faune 2026-04-08 20/1000 2026-04-09 08:36 by 哦哦123
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
[考研] 304求调剂 +10 素年祭语 2026-04-06 17/850 2026-04-08 09:05 by 蓝云思雨
[考研] 材料调剂 +17 小刘同学吖吖 2026-04-06 18/900 2026-04-07 11:41 by 诗与自由
信息提示
请填处理意见