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huangqihong

铁虫 (小有名气)

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[交流] 请教各位大侠有关PCR的问题

为什么我的基因(约2kb)PCR用EasyTaq酶(Transgen公司)能扩增出来，而用pfu酶却无法扩增，换了个公司的pfu酶也不行，不知道是哪里出问题了，请各位帮忙？

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-27 at 13:27 ]

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1楼2009-11-26 09:46:03

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huangqihong

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引用回帖:

Originally posted by 09021122 at 2009-11-26 13:39:
长度在2KB左右，一般用高保真的酶是可以扩出来的，除非有以下几点原因：
1：操作上的不规范。如果操作不是很细心的话，很容易扩不出来。
2：酶的失活。如果你的taq酶本身就是失效的，根本就扩不出来。
3：用pf ...

因为用Taq酶就能扩出来，应该不是操作或是基因组的问题，而且pfu酶又是买的新的，Takara的，酶应该不会失活。我也做梯度了，就是没有扩出来，找不到原因。

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3楼2009-11-26 14:10:08

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09021122

木虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢交流 11-26 18:25

长度在2KB左右，一般用高保真的酶是可以扩出来的，除非有以下几点原因：
1：操作上的不规范。如果操作不是很细心的话，很容易扩不出来。
2：酶的失活。如果你的taq酶本身就是失效的，根本就扩不出来。
3：用pfu酶时，退火温度是否有变化呢？如果对退火温度要求有变化的话，而你又没有调的话，也是扩不出来的。
4：应该是原材料的保证。如果全基因组有问题的话，当然是扩不出来的。

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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越