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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教各位大侠有关PCR的问题
汕头大学海洋科学接受调剂
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huangqihong

铁虫 (小有名气)

[交流] 请教各位大侠有关PCR的问题

为什么我的基因(约2kb)PCR用EasyTaq酶(Transgen公司)能扩增出来，而用pfu酶却无法扩增，换了个公司的pfu酶也不行，不知道是哪里出问题了，请各位帮忙？

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-27 at 13:27 ]
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1楼 2009-11-26 09:46:03
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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1949stone(金币+1,VIP+0):有道理 11-26 18:25
也有可能 是基因组空间构型的问题吧！高保真的酶比起Taq来更难以结合些。
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4楼2009-11-26 15:44:02
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09021122

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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1949stone(金币+3,VIP+0):谢谢交流 11-26 18:25
长度在2KB左右，一般用高保真的酶是可以扩出来的，除非有以下几点原因：
1：操作上的不规范。如果操作不是很细心的话，很容易扩不出来。
2：酶的失活。如果你的taq酶本身就是失效的，根本就扩不出来。
3：用pfu酶时，退火温度是否有变化呢？如果对退火温度要求有变化的话，而你又没有调的话，也是扩不出来的。
4：应该是原材料的保证。如果全基因组有问题的话，当然是扩不出来的。
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雄关漫道真如铁，而今迈步从头越
2楼2009-11-26 13:39:41
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huangqihong

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 09021122 at 2009-11-26 13:39:
长度在2KB左右，一般用高保真的酶是可以扩出来的，除非有以下几点原因：
1：操作上的不规范。如果操作不是很细心的话，很容易扩不出来。
2：酶的失活。如果你的taq酶本身就是失效的，根本就扩不出来。
3：用pf ...

因为用Taq酶就能扩出来，应该不是操作或是基因组的问题，而且pfu酶又是买的新的，Takara的，酶应该不会失活。我也做梯度了，就是没有扩出来，找不到原因。
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3楼2009-11-26 14:10:08
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
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1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢 11-26 18:26
从不用高保真的人飘过~建议，你的就2K，不需要用高保真的酶。MBI的Taq扩的应该没一点问题，或者你按步骤再从新做一遍，注意：高保真酶要求比较严格，请按宝生物说明书来~
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5楼2009-11-26 15:52:44
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