应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教DNA互补单链如何实现杂交
91/1返回列表
查看: 2091  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

hunter82417

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 请教DNA互补单链如何实现杂交

让DNA互补单链实现杂交，
离子强度和溶液PH有何要求？仅加入钠盐可以吗？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

基因克隆

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-23 21:08:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyde0706

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
hunter82417(金币+2,VIP+0): 11-23 22:12
amisking(金币+1,VIP+0): 11-24 16:49
理论上在水中都可以，分子碰撞。不过一般还是有杂交缓冲液或者退火缓冲液的，离子和ph对于杂交的效率以及特异性有影响。
赞一下(21人) 回复此楼
2楼2009-11-23 21:27:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingfengwu

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
hunter82417(金币+1,VIP+0): 11-24 16:47
amisking(金币+2,VIP+0): 11-24 16:50
这个也太简单了。

（1）把DNA 单链溶解于 10mM Tris, 1mM EDTA, 50 mM NaCl (pH=8.0) 溶液中。
（2）1：1混合两条互补单链。
（3）95度加热5min， 然后放到常温下，让它自然冷却，等完全冷却到室温，就可以形成互补双链了。
赞一下(21人) 回复此楼
3楼2009-11-24 15:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingfengwu

金虫 (小有名气)
不是二楼说的那样的，please。
赞一下 回复此楼
4楼2009-11-24 15:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hunter82417

铁杆木虫 (著名写手)
要加热95？
回复此楼
5楼2009-11-24 16:48:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 11-24 18:25
hunter82417(金币+1,VIP+0): 11-24 21:46
二楼说的是正确的，在水中，一定浓度DNA本身就可以通过升降温处理来形成双链，氢键引导的。
当然，离子强度和pH的影响不可忽视。若离子强度太高，不难想象整个氢键网络会出现什么变化。
若是懒得配试剂，可以在TE中先94~95℃变性几分钟，然后再缓慢降温
现在天气冷，不要直接放室温，这样降温速度太快容易造成非预期的杂交
退火buffer其实也就是TE中加了NaCl去调盐强度，这个网上一搜到处都有，遇见不同离子强度的配方也不要感到惊奇，其实效果差不多，这些都是可以容忍的范围

可以参考这个产品的使用说明，反正我用着挺好
http://www.beyotime.com/annealing-buf-dna.htm
赞一下(20人) 回复此楼
6楼2009-11-24 18:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
加热的原因是为了充分打开oligo自身形成的二级结构，然后缓慢降温的意义是为了提高杂交特异性
想象另外一个极端，如果骤冷（比如SSCP的处理方法），那么oligo都来不及和对方互补就自身形成了二级结构了
赞一下 回复此楼
7楼2009-11-24 18:23:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyde0706

木虫 (正式写手)
★
hunter82417(金币+1,VIP+0): 11-24 21:47
引用回帖:
Originally posted by qingfengwu at 2009-11-24 15:11:
不是二楼说的那样的，please。

楼主也没说具体在什么情况下杂交啊！如果是芯片杂交，一般是不加热的。如果是液相，能加热到95度当然最好，要根据实际情况考虑吧。
赞一下 回复此楼
8楼2009-11-24 21:24:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hunter82417

铁杆木虫 (著名写手)
感谢指导
回复此楼
9楼2009-11-24 21:48:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hunter82417 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-31 01:07 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-31 00:45 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-31 00:34 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 15/750 2026-08-31 00:10 by hZiFeudZyoGR
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-30 22:24 by xiangy672
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:40 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 3/150 2026-08-30 20:10 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 7/350 2026-08-30 19:45 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:35 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 3/150 2026-08-30 19:26 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 5/250 2026-08-30 18:29 by hZiFeudZyoGR
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +8 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 12/600 2026-08-30 17:11 by hZiFeudZyoGR
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 11:19 by l0VvVHGBGRLv
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 06:57 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭