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hunter82417

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 请教DNA互补单链如何实现杂交

让DNA互补单链实现杂交,
离子强度和溶液PH有何要求?仅加入钠盐可以吗?
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

加热的原因是为了充分打开oligo自身形成的二级结构,然后缓慢降温的意义是为了提高杂交特异性
想象另外一个极端,如果骤冷(比如SSCP的处理方法),那么oligo都来不及和对方互补就自身形成了二级结构了
7楼2009-11-24 18:23:23
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hyde0706

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
hunter82417(金币+2,VIP+0): 11-23 22:12
amisking(金币+1,VIP+0): 11-24 16:49
理论上在水中都可以,分子碰撞。不过一般还是有杂交缓冲液或者退火缓冲液的,离子和ph对于杂交的效率以及特异性有影响。
2楼2009-11-23 21:27:23
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qingfengwu

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
hunter82417(金币+1,VIP+0): 11-24 16:47
amisking(金币+2,VIP+0): 11-24 16:50
这个也太简单了。

(1)把DNA 单链溶解于 10mM Tris, 1mM EDTA, 50 mM NaCl (pH=8.0) 溶液中。
(2)1:1混合两条互补单链。
(3)95度加热5min, 然后放到常温下,让它自然冷却,等完全冷却到室温,就可以形成互补双链了。
3楼2009-11-24 15:11:03
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qingfengwu

金虫 (小有名气)

不是二楼说的那样的,please。
4楼2009-11-24 15:11:46
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