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hunter82417铁杆木虫 (著名写手)
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[交流]
请教DNA互补单链如何实现杂交
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让DNA互补单链实现杂交， 离子强度和溶液PH有何要求？仅加入钠盐可以吗？ |
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4楼2009-11-24 15:11:46
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amisking(金币+4,VIP+0): 11-24 18:25
hunter82417(金币+1,VIP+0): 11-24 21:46
amisking(金币+4,VIP+0): 11-24 18:25
hunter82417(金币+1,VIP+0): 11-24 21:46
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二楼说的是正确的，在水中，一定浓度DNA本身就可以通过升降温处理来形成双链，氢键引导的。 当然，离子强度和pH的影响不可忽视。若离子强度太高，不难想象整个氢键网络会出现什么变化。 若是懒得配试剂，可以在TE中先94~95℃变性几分钟，然后再缓慢降温 现在天气冷，不要直接放室温，这样降温速度太快容易造成非预期的杂交 退火buffer其实也就是TE中加了NaCl去调盐强度，这个网上一搜到处都有，遇见不同离子强度的配方也不要感到惊奇，其实效果差不多，这些都是可以容忍的范围 可以参考这个产品的使用说明，反正我用着挺好 http://www.beyotime.com/annealing-buf-dna.htm |
6楼2009-11-24 18:22:07
