24小时热门版块排行榜    

查看: 2027  |  回复: 8
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hunter82417

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 请教DNA互补单链如何实现杂交

让DNA互补单链实现杂交,
离子强度和溶液PH有何要求?仅加入钠盐可以吗?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+4,VIP+0): 11-24 18:25
hunter82417(金币+1,VIP+0): 11-24 21:46
二楼说的是正确的,在水中,一定浓度DNA本身就可以通过升降温处理来形成双链,氢键引导的。
当然,离子强度和pH的影响不可忽视。若离子强度太高,不难想象整个氢键网络会出现什么变化。
若是懒得配试剂,可以在TE中先94~95℃变性几分钟,然后再缓慢降温
现在天气冷,不要直接放室温,这样降温速度太快容易造成非预期的杂交
退火buffer其实也就是TE中加了NaCl去调盐强度,这个网上一搜到处都有,遇见不同离子强度的配方也不要感到惊奇,其实效果差不多,这些都是可以容忍的范围

可以参考这个产品的使用说明,反正我用着挺好
http://www.beyotime.com/annealing-buf-dna.htm
6楼2009-11-24 18:22:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

hyde0706

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
hunter82417(金币+2,VIP+0): 11-23 22:12
amisking(金币+1,VIP+0): 11-24 16:49
理论上在水中都可以,分子碰撞。不过一般还是有杂交缓冲液或者退火缓冲液的,离子和ph对于杂交的效率以及特异性有影响。
2楼2009-11-23 21:27:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingfengwu

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
hunter82417(金币+1,VIP+0): 11-24 16:47
amisking(金币+2,VIP+0): 11-24 16:50
这个也太简单了。

(1)把DNA 单链溶解于 10mM Tris, 1mM EDTA, 50 mM NaCl (pH=8.0) 溶液中。
(2)1:1混合两条互补单链。
(3)95度加热5min, 然后放到常温下,让它自然冷却,等完全冷却到室温,就可以形成互补双链了。
3楼2009-11-24 15:11:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qingfengwu

金虫 (小有名气)

不是二楼说的那样的,please。
4楼2009-11-24 15:11:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +3 布布和一二 2026-08-08 3/150 2026-08-08 18:15 by Lightingo
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 5/250 2026-08-08 15:59 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:39 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +11 且听虎啸 2026-08-07 14/700 2026-08-08 12:50 by 布布和一二
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
信息提示
请填处理意见