应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关构建质粒的一些问题
汕头大学海洋科学接受调剂
181/2返回列表12下一页
查看: 1062  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

LIU0118

[交流] 关构建质粒的一些问题

总是不能构建成功，连接完进行转化涂板都会长出很多的菌落，酶切鉴定无正确的，大多是载体自成环，请教一下应从哪些步骤来解决，请大侠多多帮忙~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-11-19 10:37:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
★
1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:27
self ligation的话就dephosphoralation
一般如果不是同一个酶切位点的话 多挑几个还是能挑出来的
挑不出来直接处理vector 脱磷酸后怎么它也自己连不起来了
赞一下(10人) 回复此楼
2楼2009-11-19 10:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grief

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:27
载体的酶切要保证完全，按照说明书上适当的扩大酶切体系和酶的用量，注意酶量不能超过体系的1/10。如果切下来的片段大的话，做个电泳，纯化回收。
连接的时候做阴性对照，如果对照平板上菌落太多，分析清楚原因在做，这样会好些的。
赞一下(11人) 回复此楼
等待秋天
3楼2009-11-19 11:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

message

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用去磷酸化酶可以减少很多工作，换个好点的酶。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-11-19 15:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

solopen

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你加的质粒量可能过大了
把目的片段和质粒的比关系调一调
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-11-19 16:51:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caoliang38

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议楼主把详细细节写清楚 否则回帖只能是按照自己的经验回复 而不是针对楼主的 谢谢
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-11-19 19:48:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漫迹

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我正准备做双酶切连接，构建载体呢，一同学习中，嘿嘿
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-11-19 20:50:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
补充一下 我用toyobo的ligation high v2
然后摩尔比3/1
一般都没问题
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-11-20 09:47:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jack_dong

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by heismeng at 2009-11-20 09:47:
补充一下 我用toyobo的ligation high v2
然后摩尔比3/1
一般都没问题

toyobo?  好像不怎么好用吧？

呵呵呵，个人观点
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2009-11-20 10:19:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

foreverjohn

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
总结一下：载体去磷，使用双没切，加大片段的量，作对照等！更重要的时候如果阳性克隆比较少，可以先菌落PCR找阳性克隆，再进行验证
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2009-11-20 13:17:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 LIU0118 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本科211，报考085601-310分 +15 ararak 2026-04-13 15/750 2026-04-14 13:57 by 三七七想上岸
[考研] 291 求调剂 +36 化工2026届毕业� 2026-04-09 36/1800 2026-04-14 13:20 by 第一天好
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +5 zju2000 2026-04-14 16/800 2026-04-14 11:55 by colck
[基金申请] 山东省基金2026 +6 jerry681 2026-04-08 7/350 2026-04-14 10:08 by 羁俗
[考研] 材料工程085601，270求调剂 +41 @ASDF1234 2026-04-08 44/2200 2026-04-14 09:23 by barlinike
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +4 双一流本科机械 2026-04-08 4/200 2026-04-14 07:32 by Abskk
[考研] 273求调剂 +3 白居不易. 2026-04-09 5/250 2026-04-13 19:27 by or7ro
[基金申请] 2026 WR青拔 +3 冬日阳光CAS 2026-04-09 6/300 2026-04-13 18:40 by liuchb715
[考研] 322求调剂，08工科 +4 今天是个小号 2026-04-08 4/200 2026-04-13 00:20 by baobaoye
[考研] 求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分， +8 材化李可 2026-04-11 10/500 2026-04-12 08:42 by 852137818
[考研] 275求调剂 +9 1624447980 2026-04-08 10/500 2026-04-11 10:20 by Delta2012
[考研] 材料类284调剂 +40 想换手机不想解� 2026-04-08 48/2400 2026-04-10 23:28 by 314126402
[考研] 本科211 工科085400 280分求调剂 可跨专业 +3 LZH（等待调剂中 2026-04-09 3/150 2026-04-09 21:29 by wutongshun
[考研] 一志愿武理车辆 281 求调剂 +5 上岸研究生. 2026-04-07 5/250 2026-04-09 15:56 by only周
[考研] 311求调剂 +6 surte 2026-04-08 13/650 2026-04-09 14:00 by surte
[考研] 086000生物与医药调剂 +7 awwwwwooooo 2026-04-09 7/350 2026-04-09 13:31 by 北极159263
[考研] 招收有机化学、化工，药学，食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 求调剂 +3 猪肉墩粉条cc 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:05 by 猪肉墩粉条cc
[考研] 334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 09:28 by wdyheheeh
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭