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seahow

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从楼主等表现来看,大半时酶切不完全,
其实,你可以单酶切,这样可以保证你酶切完全。每次切完都是个检验,所以,在屡次连接不上等时候,这是一个廉价 简便等选择。

gooooooooood lucky
11楼2009-11-20 13:48:08
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LIU0118

谢谢各位的回答,我再试一试~
12楼2009-11-21 13:23:45
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heismeng

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by Jack_dong at 2009-11-20 10:19:





toyobo?  好像不怎么好用吧?

呵呵呵,个人观点

因人而异吧 我在日本 用的还挺好
我现在实验室只用这一种酶 用习惯就好了 嘿嘿
13楼2009-11-24 08:49:00
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LIU0118

谢谢各位大侠,我已经构建成功啦~
14楼2009-11-25 13:45:14
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漫迹

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
请问楼主是单酶切还是双酶切,单酶切自连得可能性就是很大,但双酶切后进行切胶回收应该会好些的
15楼2009-11-25 14:52:53
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LIU0118

引用回帖:
Originally posted by 漫迹 at 2009-11-25 14:52:
请问楼主是单酶切还是双酶切,单酶切自连得可能性就是很大,但双酶切后进行切胶回收应该会好些的

双酶切,呵呵 已经构建成功啦 谢谢你的关注!
16楼2009-11-25 15:02:31
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lying09

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我在构建质粒这纠结着呢。。。
郁闷
17楼2009-11-25 19:10:17
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Yanbird

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by heismeng at 2009-11-19 10:46:
self ligation的话就dephosphoralation
一般如果不是同一个酶切位点的话 多挑几个还是能挑出来的
挑不出来直接处理vector 脱磷酸后怎么它也自己连不起来了

我们也一样,做双酶切后跑样有时候看不到条带,有时候看到条带,连接转化之后长出的菌落提取质粒酶切又不对。很烦恼!!
18楼2009-11-26 21:47:10
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