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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关构建质粒的一些问题
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seahow

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从楼主等表现来看，大半时酶切不完全，
其实，你可以单酶切，这样可以保证你酶切完全。每次切完都是个检验，所以，在屡次连接不上等时候，这是一个廉价 简便等选择。

gooooooooood lucky
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11楼2009-11-20 13:48:08
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LIU0118

谢谢各位的回答，我再试一试~
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12楼2009-11-21 13:23:45
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heismeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by Jack_dong at 2009-11-20 10:19:





toyobo?  好像不怎么好用吧？

呵呵呵，个人观点

因人而异吧 我在日本 用的还挺好
我现在实验室只用这一种酶 用习惯就好了 嘿嘿
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13楼2009-11-24 08:49:00
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LIU0118

谢谢各位大侠，我已经构建成功啦~
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14楼2009-11-25 13:45:14
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漫迹

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问楼主是单酶切还是双酶切，单酶切自连得可能性就是很大，但双酶切后进行切胶回收应该会好些的
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15楼2009-11-25 14:52:53
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LIU0118

引用回帖:
Originally posted by 漫迹 at 2009-11-25 14:52:
请问楼主是单酶切还是双酶切，单酶切自连得可能性就是很大，但双酶切后进行切胶回收应该会好些的

双酶切，呵呵 已经构建成功啦 谢谢你的关注！
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16楼2009-11-25 15:02:31
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lying09

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我在构建质粒这纠结着呢。。。
郁闷
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17楼2009-11-25 19:10:17
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Yanbird

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by heismeng at 2009-11-19 10:46:
self ligation的话就dephosphoralation
一般如果不是同一个酶切位点的话 多挑几个还是能挑出来的
挑不出来直接处理vector 脱磷酸后怎么它也自己连不起来了

我们也一样，做双酶切后跑样有时候看不到条带，有时候看到条带，连接转化之后长出的菌落提取质粒酶切又不对。很烦恼！！
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18楼2009-11-26 21:47:10
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