24小时热门版块排行榜    

查看: 1244  |  回复: 17
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

LIU0118

[交流] 关构建质粒的一些问题

总是不能构建成功,连接完进行转化涂板都会长出很多的菌落,酶切鉴定无正确的,大多是载体自成环,请教一下应从哪些步骤来解决,请大侠多多帮忙~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LIU0118

谢谢各位的回答,我再试一试~
12楼2009-11-21 13:23:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

heismeng

金虫 (小有名气)


1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:27
self ligation的话就dephosphoralation
一般如果不是同一个酶切位点的话 多挑几个还是能挑出来的
挑不出来直接处理vector 脱磷酸后怎么它也自己连不起来了
2楼2009-11-19 10:46:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grief

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:27
载体的酶切要保证完全,按照说明书上适当的扩大酶切体系和酶的用量,注意酶量不能超过体系的1/10。如果切下来的片段大的话,做个电泳,纯化回收。
连接的时候做阴性对照,如果对照平板上菌落太多,分析清楚原因在做,这样会好些的。
等待秋天
3楼2009-11-19 11:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

message

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用去磷酸化酶可以减少很多工作,换个好点的酶。
4楼2009-11-19 15:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生(3个名额)地质化工冶金领域 +34 AI8RaGaPaSCR 2026-08-07 36/1800 2026-08-13 22:45 by jBlZNDB0Qx9J
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +10 医学老男孩 2026-08-13 28/1400 2026-08-13 22:44 by 医学老男孩
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 10/500 2026-08-13 20:42 by hmhminy
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +4 majunge000 2026-08-11 6/300 2026-08-13 16:50 by 四季常青藤
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
请填处理意见