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[交流] 关构建质粒的一些问题

总是不能构建成功，连接完进行转化涂板都会长出很多的菌落，酶切鉴定无正确的，大多是载体自成环，请教一下应从哪些步骤来解决，请大侠多多帮忙~

1楼2009-11-19 10:37:28

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:27

载体的酶切要保证完全，按照说明书上适当的扩大酶切体系和酶的用量，注意酶量不能超过体系的1/10。如果切下来的片段大的话，做个电泳，纯化回收。
连接的时候做阴性对照，如果对照平板上菌落太多，分析清楚原因在做，这样会好些的。

等待秋天

3楼2009-11-19 11:14:57

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