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汕头大学海洋科学接受调剂
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LIU0118

[交流] 关构建质粒的一些问题

总是不能构建成功,连接完进行转化涂板都会长出很多的菌落,酶切鉴定无正确的,大多是载体自成环,请教一下应从哪些步骤来解决,请大侠多多帮忙~
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caoliang38

铁虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议楼主把详细细节写清楚 否则回帖只能是按照自己的经验回复 而不是针对楼主的 谢谢
6楼2009-11-19 19:48:48
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查看全部 18 个回答

heismeng

金虫 (小有名气)


1949stone(金币+1,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:27
self ligation的话就dephosphoralation
一般如果不是同一个酶切位点的话 多挑几个还是能挑出来的
挑不出来直接处理vector 脱磷酸后怎么它也自己连不起来了
2楼2009-11-19 10:46:06
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grief

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2,VIP+0):谢谢交流 11-19 17:27
载体的酶切要保证完全,按照说明书上适当的扩大酶切体系和酶的用量,注意酶量不能超过体系的1/10。如果切下来的片段大的话,做个电泳,纯化回收。
连接的时候做阴性对照,如果对照平板上菌落太多,分析清楚原因在做,这样会好些的。
等待秋天
3楼2009-11-19 11:14:57
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message

铁虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
用去磷酸化酶可以减少很多工作,换个好点的酶。
4楼2009-11-19 15:45:01
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