| 查看: 1876 | 回复: 0 | |||
夏末～易科新虫 (小有名气)
|
[交流]
CCK8实验注意事项
|
|
CCK8实验注意事项 一、试剂使用与保存 1. 避光保存：试剂需在-20℃避光保存，避免反复冻融；使用前需平衡至室温以维持活性。 2. 防污染操作：移液需使用无菌枪头，避免微生物污染导致试剂失效。 二、细胞处理要点 1. 细胞密度优化：贴壁细胞建议每孔接种500-10000个（毒性实验需更高密度，增殖实验可适当降低）。 预实验确定最佳细胞量，避免过密（营养耗尽导致假阴性）或过稀（信号弱）。 2. 均匀铺板：细胞悬液需充分混匀，接种时每加5孔后吹打一次防止沉淀。 边缘孔加入PBS或培养基以减少蒸发干扰。 3. 预培养稳定：贴壁细胞需预培养2-6小时后再加试剂，悬浮细胞可直接实验8。 三、实验操作规范 1. 试剂添加：每孔加10μL CCK8溶液，避免产生气泡（可调节移液器档位至“吸二档打一档”）若培养基体积变化（如原体积200μL），需按比例调整CCK8用量 2. 孵育时间控制：常规孵育1-4小时，每隔2小时检测吸光度，OD值控制在1.0左右为宜。显色不足或过久均影响结果准确性。 四、干扰因素排除 1. 背景干扰处理：含酚红培养基或高浓度血清需设置空白对照（培养基+CCK8，无细胞）。有色药物需提前检测吸光度干扰，必要时换液后再加CCK8。 2. 数据校正：计算细胞存活率或抑制率时，需扣除空白孔吸光度（公式：存活率=As?AbAs?Ab/Ac?AbAc?Ab×100%）。 五、其他关键细节 1. 复孔设置：每组设置4-6个复孔，药物浓度梯度需3个复孔取均值。 2. 仪器校准：酶标仪检测波长建议450nm，双波长检测可选参考波长600-650nm。 总结：CCK8实验需严格把控细胞密度、试剂活性及操作规范，通过预实验优化条件，并合理设置对照以排除干扰，确保数据可靠性。  发自小木虫手机客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
-
透明质酸酶的作用机制：如何实现药物递送
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有92人回复
-
爱思维尔旗下LWT投稿
已经有9人回复
-
替拉扎明为缺氧选择性细胞毒药物研究提供新思路
已经有0人回复
-
拉坦前列腺素(Latanoprost)：前列腺素F2α衍生物如何成为青光眼一线用药
已经有0人回复
-
卟啉家族中的明星分子：MESO-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉的性质与制备
已经有1人回复
-
宠物寄生虫防治：氟雷拉纳阻断GABA受体，持效12周驱杀跳蚤蜱虫
已经有0人回复
-
为呼吸打开通道：依伐卡托的科学之旅
已经有1人回复
-
Dordaviprone（ONC201）：小分子药物在中线胶质瘤中的应用
已经有0人回复
-
依喜替康：新型喜树碱衍生物的研究进展
已经有1人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
20
精华III:
