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yoyoyehan

[交流] 双酶切的酶量加多少?

用的是TaKaRa的XbaI 和XhoI酶,20ul体系,XbaI  1ul
                                                                   XhoI  1ul
                                                                    10XM    2ul
                                                                       DNA  5ul
                                                                  ddH2O    11ul
请问各位虫友:有用过这两个酶的么? 请问我的酶量加的对不?因为单酶切20ul体系中  Xbal和Xhol各是1ul。
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jgsghw

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
要试DNA的浓度确定DNA的体积,我做了很多次双酶切,BamhI和HindIII,都是DNA的浓度不对
10楼2009-10-31 18:27:56
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黑罕

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我做体系是
15ul体系,XbaI  0.5ul
               XhoI  0.5ul
              10XM    2ul
                DNA  视浓度而定l
       ddH2O     补足    15ul
2楼2009-10-30 12:51:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
按照说明书
另总酶量不超过总体积的10%
3楼2009-10-30 12:53:43
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yoyoyehan

引用回帖:
Originally posted by 黑罕 at 2009-10-30 12:51:
我做体系是
15ul体系,XbaI  0.5ul
               XhoI  0.5ul
              10XM    2ul
                DNA  视浓度而定l
       ddH2O     补足    15ul

请问你的酶切反应多长时间呀? 我的是37度  6h ,但是我发现pet和目的片段酶切后 连接  转入DH5α中,怎么没有菌落长出呢?  是不是我的酶切没有切好呀?
4楼2009-10-30 15:57:00
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