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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 双酶切的酶量加多少？
汕头大学海洋科学接受调剂
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yoyoyehan

[交流] 双酶切的酶量加多少？

用的是TaKaRa的XbaI 和XhoI酶，20ul体系，XbaI  1ul
                                                                   XhoI  1ul
                                                                    10XM    2ul
                                                                       DNA  5ul
                                                                  ddH2O    11ul
请问各位虫友：有用过这两个酶的么？ 请问我的酶量加的对不？因为单酶切20ul体系中  Xbal和Xhol各是1ul。
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1楼 2009-10-30 11:10:08
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黑罕

金虫 (小有名气)
★
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我做体系是
15ul体系，XbaI  0.5ul
               XhoI  0.5ul
              10XM    2ul
                DNA  视浓度而定l
       ddH2O     补足    15ul
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2楼2009-10-30 12:51:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
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按照说明书
另总酶量不超过总体积的10%
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3楼2009-10-30 12:53:43
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yoyoyehan

引用回帖:
Originally posted by 黑罕 at 2009-10-30 12:51:
我做体系是
15ul体系，XbaI  0.5ul
               XhoI  0.5ul
              10XM    2ul
                DNA  视浓度而定l
       ddH2O     补足    15ul

请问你的酶切反应多长时间呀？ 我的是37度  6h ，但是我发现pet和目的片段酶切后 连接  转入DH5α中，怎么没有菌落长出呢？  是不是我的酶切没有切好呀？
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4楼2009-10-30 15:57:00
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Entrez1110

0.5uL足够了.
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5楼2009-10-30 16:30:23
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qqsvery

木虫 (著名写手)
★
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你酶切时间有点短，一般我们下午做好，过夜，明天再转！
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谎言和真实在河边洗澡，谎言先洗好，穿走了真实的衣服，真实却不肯穿谎言的衣服。后来人们眼里只有穿着真实衣服的谎言，却很难接受赤裸裸的真实。
6楼2009-10-30 16:36:28
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yinhuali123

银虫 (小有名气)
我做连接也是不这么好，不知道到底是酶切不充分还是怎么的，过夜切了后的连接效果是不是很好？我以前过夜切过，不过电泳后感觉条带不怎么好。
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7楼2009-10-30 21:07:07
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j2

木虫 (正式写手)
★
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酶好像加0.5就可以了，DNA是看浓度的，浓度高就少加低就多加
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修炼ｉｎｇ，当虫仙……
8楼2009-10-30 21:40:23
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cpuwzq

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
0.5UL足矣。我一般切2h就够啦
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9楼2009-10-31 14:01:42
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jgsghw

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
要试DNA的浓度确定DNA的体积，我做了很多次双酶切，BamhI和HindIII，都是DNA的浓度不对
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10楼2009-10-31 18:27:56
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