应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒中多余片段的消除
51/1返回列表
查看: 1984  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

youngman57

铁虫 (初入文坛)

[交流] 质粒中多余片段的消除 已有4人参与

想问一下各位大佬，怎么将质粒上多余的片段删掉，我用的无缝克隆的方法，但是失败了，我先设计引物pcr，之后连接转化到dh5α中，在培养基中也长出了单菌落，就是使用菌落pcr时p不出来条带，按道理来说应该有条带的，对照我用的质粒可以p出来，三千的条带，删除多余的按道理来说应该有二千的条带，但是就什么条带都没有，不知道怎么回事，望大佬能说一下，我实验室有人也是真么做的就可以。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2024-11-01 20:06:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1420488582

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
无缝克隆同源重组方案：
方案设计的扩增引物要带有载体同源臂
线性载体处理背景要处理干净

你这个原因，因该是没有构建成功
赞一下 回复此楼
江苏赛索飞生物科技有限公司（引物合成，基因合成，一代测序，蛋白，病毒包装）
3楼2024-11-12 11:00:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

傲娇小丫头

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
无缝克隆--同源重组  引物设计是否正确？
引物无误的话，可以挑几个单菌落送测序看看
赞一下 回复此楼
一万年太久，只争朝夕。。。。。
2楼2024-11-05 09:18:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

strongFv

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果长了单菌落但是P不出来，也可能是扩增的问题，菌模板本身不好P。可以试试用菌P专家这一类专用的酶试试（达领生物的），或者重新设计鉴定引物，缩短扩增长度，也会更好P一点。
赞一下 回复此楼
4楼2024-12-18 11:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huanglyxm

至尊木虫 (知名作家)

认真就输了
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同源臂可以稍微长一点，反正引物低于59个碱基都是五毛钱，20个bp的同源臂总觉得不太够。

发自小木虫手机客户端
赞一下 回复此楼
时间可以回到起点，却已不再是昨天
5楼2024-12-24 11:36:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 13/650 2026-03-15 12:20 by NSFC2026我来了
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-09 7/350 2026-03-15 00:58 by 秋有木北
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:57 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +6 yfihxh 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:18 by JourneyLucky
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:06 by 星空星月
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 285求调剂 +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 277求调剂 +4 anchor17 2026-03-12 4/200 2026-03-13 11:15 by 白夜悠长
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 0857 资源与环境 285分 +6 未名考生 2026-03-09 6/300 2026-03-11 21:08 by 30660438
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭