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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒中多余片段的消除
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youngman57

铁虫 (初入文坛)

[交流] 质粒中多余片段的消除 已有4人参与

想问一下各位大佬，怎么将质粒上多余的片段删掉，我用的无缝克隆的方法，但是失败了，我先设计引物pcr，之后连接转化到dh5α中，在培养基中也长出了单菌落，就是使用菌落pcr时p不出来条带，按道理来说应该有条带的，对照我用的质粒可以p出来，三千的条带，删除多余的按道理来说应该有二千的条带，但是就什么条带都没有，不知道怎么回事，望大佬能说一下，我实验室有人也是真么做的就可以。
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1楼 2024-11-01 20:06:05
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傲娇小丫头

新虫 (小有名气)
★
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无缝克隆--同源重组  引物设计是否正确？
引物无误的话，可以挑几个单菌落送测序看看
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一万年太久，只争朝夕。。。。。
2楼2024-11-05 09:18:45
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1420488582

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
无缝克隆同源重组方案：
方案设计的扩增引物要带有载体同源臂
线性载体处理背景要处理干净

你这个原因，因该是没有构建成功
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江苏赛索飞生物科技有限公司（引物合成，基因合成，一代测序，蛋白，病毒包装）
3楼2024-11-12 11:00:30
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strongFv

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果长了单菌落但是P不出来，也可能是扩增的问题，菌模板本身不好P。可以试试用菌P专家这一类专用的酶试试（达领生物的），或者重新设计鉴定引物，缩短扩增长度，也会更好P一点。
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4楼2024-12-18 11:32:03
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huanglyxm

至尊木虫 (知名作家)

认真就输了
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同源臂可以稍微长一点，反正引物低于59个碱基都是五毛钱，20个bp的同源臂总觉得不太够。

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时间可以回到起点，却已不再是昨天
5楼2024-12-24 11:36:08
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