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2011218421

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白透析复性析出 已有3人参与

就是包涵体蛋白进行透析复性,复性液梯度是 6M 4M 2M 1M 0M,但是蛋白一到 2M 就析出,这是什么原因啊,也尝试过加了 3M 依旧是 2M 的时候析出,用的是尿素溶解包涵体

@starseacow 发自小木虫Android客户端
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纯咩咩咩

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

https://www.novopro.cn/tools/prot-sol.html可以用这个网站测一下可溶性,存在一种可能,你这个蛋白不可溶。。。。
2楼2024-12-23 09:28:19
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huanglyxm

至尊木虫 (知名作家)

认真就输了

【答案】应助回帖

包含体蛋白的纯化,简直有点像玄学一样的存在。虽然大肠杆菌的表达量会大很多,但是强烈建议如果为了纯化活性蛋白的话,用昆虫细胞或者使用哺乳动物细胞会好很多,尤其是如果表达分泌蛋白,其实从培养基上清里面纯化这些分泌蛋白也挺方便的。如果你一定要用大肠杆菌的话,我建议你还是优化诱导表达条件,让他能够慢慢的表达。再者就是可以给蛋白加一些比较大的那个标签,降低聚集的可能性。

发自小木虫手机客户端
时间可以回到起点,却已不再是昨天
3楼2024-12-24 10:43:08
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masterHT

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

析出很正常,包涵体复性正确折叠本来就不是大概率事件。一个蛋白复性率能达到20%以上应该都算一个比较不错的水平了。你可以尝试使用0.6M 精氨酸,pH 8.5当作复性缓冲,大概率会降低析出现象,但是对复性回收率提高应该不会改善太大
4楼2025-02-13 14:26:20
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