24小时热门版块排行榜    

查看: 5108  |  回复: 3
【悬赏金币】回答本帖问题,作者2011218421将赠送您 15 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

2011218421

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白透析复性析出 已有3人参与

就是包涵体蛋白进行透析复性,复性液梯度是 6M 4M 2M 1M 0M,但是蛋白一到 2M 就析出,这是什么原因啊,也尝试过加了 3M 依旧是 2M 的时候析出,用的是尿素溶解包涵体

@starseacow 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huanglyxm

至尊木虫 (知名作家)

认真就输了

【答案】应助回帖

包含体蛋白的纯化,简直有点像玄学一样的存在。虽然大肠杆菌的表达量会大很多,但是强烈建议如果为了纯化活性蛋白的话,用昆虫细胞或者使用哺乳动物细胞会好很多,尤其是如果表达分泌蛋白,其实从培养基上清里面纯化这些分泌蛋白也挺方便的。如果你一定要用大肠杆菌的话,我建议你还是优化诱导表达条件,让他能够慢慢的表达。再者就是可以给蛋白加一些比较大的那个标签,降低聚集的可能性。

发自小木虫手机客户端
时间可以回到起点,却已不再是昨天
3楼2024-12-24 10:43:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

纯咩咩咩

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

https://www.novopro.cn/tools/prot-sol.html可以用这个网站测一下可溶性,存在一种可能,你这个蛋白不可溶。。。。
2楼2024-12-23 09:28:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

masterHT

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

析出很正常,包涵体复性正确折叠本来就不是大概率事件。一个蛋白复性率能达到20%以上应该都算一个比较不错的水平了。你可以尝试使用0.6M 精氨酸,pH 8.5当作复性缓冲,大概率会降低析出现象,但是对复性回收率提高应该不会改善太大
4楼2025-02-13 14:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:40 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 7/350 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中,邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[文学芳草园] 两块石头 +6 阿美_Lml888 2026-09-03 8/400 2026-09-05 13:52 by 阿美_Lml888
[文学芳草园] 初秋的晨风 +4 阿美_Lml888 2026-09-04 6/300 2026-09-05 13:51 by 阿美_Lml888
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才!!! +4 SCSIOyxguo 2026-09-03 7/350 2026-09-05 10:39 by Honglianlian
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
请填处理意见