24小时热门版块排行榜    

查看: 5036  |  回复: 3
【悬赏金币】回答本帖问题,作者2011218421将赠送您 15 个金币

2011218421

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白透析复性析出 已有3人参与

就是包涵体蛋白进行透析复性,复性液梯度是 6M 4M 2M 1M 0M,但是蛋白一到 2M 就析出,这是什么原因啊,也尝试过加了 3M 依旧是 2M 的时候析出,用的是尿素溶解包涵体

@starseacow 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

纯咩咩咩

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

https://www.novopro.cn/tools/prot-sol.html可以用这个网站测一下可溶性,存在一种可能,你这个蛋白不可溶。。。。
2楼2024-12-23 09:28:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huanglyxm

至尊木虫 (知名作家)

认真就输了

【答案】应助回帖

包含体蛋白的纯化,简直有点像玄学一样的存在。虽然大肠杆菌的表达量会大很多,但是强烈建议如果为了纯化活性蛋白的话,用昆虫细胞或者使用哺乳动物细胞会好很多,尤其是如果表达分泌蛋白,其实从培养基上清里面纯化这些分泌蛋白也挺方便的。如果你一定要用大肠杆菌的话,我建议你还是优化诱导表达条件,让他能够慢慢的表达。再者就是可以给蛋白加一些比较大的那个标签,降低聚集的可能性。

发自小木虫手机客户端
时间可以回到起点,却已不再是昨天
3楼2024-12-24 10:43:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

masterHT

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

析出很正常,包涵体复性正确折叠本来就不是大概率事件。一个蛋白复性率能达到20%以上应该都算一个比较不错的水平了。你可以尝试使用0.6M 精氨酸,pH 8.5当作复性缓冲,大概率会降低析出现象,但是对复性回收率提高应该不会改善太大
4楼2025-02-13 14:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 2011218421 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 08:33 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 06:35 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 06:22 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 05:40 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:34 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
信息提示
请填处理意见