应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用基因组p一个3k多的片段，一直p不出来，了
101/1返回列表
查看: 1692  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者学员tll8Yk将赠送您 5 个金币

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)

[求助] 用基因组p一个3k多的片段，一直p不出来，了 已有2人参与

用的高保真酶，温度从58变到55度，延伸和退火的时间和温度一直在变，p不出来，快疯了，p了几个礼拜

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2024-07-19 16:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
用基因组p一个3k多的片段，一直p不出来，了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2024-07-19 16:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
老是没有目的条带，应该在5000marker的第二个条带那里

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2024-07-19 16:41:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AD_com

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
P不出来就换引物，前后多设计几对引物交叉组合使用，不要纠结于温度，温度上下差几度都没问题，再不行就去做基因合成
赞一下 回复此楼
4楼2024-07-20 07:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by AD_com at 2024-07-20 07:16:53
P不出来就换引物，前后多设计几对引物交叉组合使用，不要纠结于温度，温度上下差几度都没问题，再不行就去做基因合成

那可以提高胶浓度嘛

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2024-07-21 07:11:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AD_com

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xzwlove at 2024-07-21 07:11:19
那可以提高胶浓度嘛
...

扩不出来就换引物，比摸索条件有意义，何况一件事情要是基础不好，再怎么掩饰都无济于事。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2024-07-21 15:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

御风（远）

新虫 (初入文坛)
PCR起到关键作用的是引物和酶（本质），其他优化都是治标不治本，赶紧看看引物设计的质量。或者换酶（MIX也行）
赞一下 回复此楼
7楼2024-07-22 17:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by AD_com at 2024-07-21 15:41:40
扩不出来就换引物，比摸索条件有意义，何况一件事情要是基础不好，再怎么掩饰都无济于事。...

好吧谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
8楼2024-07-23 18:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 御风（远） at 2024-07-22 17:00:52
PCR起到关键作用的是引物和酶（本质），其他优化都是治标不治本，赶紧看看引物设计的质量。或者换酶（MIX也行）

好的谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2024-07-23 18:44:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YaVirology

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

试一试自己配一套PCR体系，加入一些DMSO和甜菜碱，具体配方论文里都有；

另外就是引物是不是太不特异了，我看杂带都很多，试着用NCBI Blast设计引物，让引物特异性高一些。
赞一下 回复此楼
10楼2024-07-28 20:20:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员tll8Yk 的主题更新
101/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 286求调剂 +10 Faune 2026-03-21 10/500 2026-03-21 23:34 by 314126402
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +3 vv迷 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:05 by f19980501
[考研] 354求调剂 +6 Tyoumou 2026-03-18 9/450 2026-03-21 20:47 by lbsjt
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +6 梨花珞晚风 2026-03-17 6/300 2026-03-21 03:40 by JourneyLucky
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 271材料工程求调剂 +8 .6lL 2026-03-18 8/400 2026-03-21 00:58 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 287求调剂 +7 晨昏线与星海 2026-03-19 8/400 2026-03-20 22:19 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工 322求调剂 +4 然11 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:12 by luoyongfeng
[考研] 290求调剂 +7 ^O^乜 2026-03-19 7/350 2026-03-20 21:43 by JourneyLucky
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[考研] 广西大学家禽遗传育种课题组2026年硕士招生（接收计算机专业调剂） +3 123阿标 2026-03-17 3/150 2026-03-20 15:58 by 飞行琦
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 一志愿苏州大学材料工程（085601）专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭