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学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)

[求助] 用基因组p一个3k多的片段,一直p不出来,了 已有2人参与

用的高保真酶,温度从58变到55度,延伸和退火的时间和温度一直在变,p不出来,快疯了,p了几个礼拜

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YaVirology

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

试一试自己配一套PCR体系,加入一些DMSO和甜菜碱,具体配方论文里都有;

另外就是引物是不是太不特异了,我看杂带都很多,试着用NCBI Blast设计引物,让引物特异性高一些。
10楼2024-07-28 20:20:35
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学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)

2楼2024-07-19 16:40:17
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学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)

老是没有目的条带,应该在5000marker的第二个条带那里

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3楼2024-07-19 16:41:22
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金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
P不出来就换引物,前后多设计几对引物交叉组合使用,不要纠结于温度,温度上下差几度都没问题,再不行就去做基因合成
4楼2024-07-20 07:16:53
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