应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用基因组p一个3k多的片段，一直p不出来，了
101/1返回列表
查看: 2053  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者学员tll8Yk将赠送您 5 个金币

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)

[求助] 用基因组p一个3k多的片段，一直p不出来，了 已有2人参与

用的高保真酶，温度从58变到55度，延伸和退火的时间和温度一直在变，p不出来，快疯了，p了几个礼拜

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2024-07-19 16:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
用基因组p一个3k多的片段，一直p不出来，了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2024-07-19 16:40:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
老是没有目的条带，应该在5000marker的第二个条带那里

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2024-07-19 16:41:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AD_com

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
P不出来就换引物，前后多设计几对引物交叉组合使用，不要纠结于温度，温度上下差几度都没问题，再不行就去做基因合成
赞一下 回复此楼
4楼2024-07-20 07:16:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by AD_com at 2024-07-20 07:16:53
P不出来就换引物，前后多设计几对引物交叉组合使用，不要纠结于温度，温度上下差几度都没问题，再不行就去做基因合成

那可以提高胶浓度嘛

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2024-07-21 07:11:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AD_com

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xzwlove at 2024-07-21 07:11:19
那可以提高胶浓度嘛
...

扩不出来就换引物，比摸索条件有意义，何况一件事情要是基础不好，再怎么掩饰都无济于事。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2024-07-21 15:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

御风（远）

新虫 (初入文坛)
PCR起到关键作用的是引物和酶（本质），其他优化都是治标不治本，赶紧看看引物设计的质量。或者换酶（MIX也行）
赞一下 回复此楼
7楼2024-07-22 17:00:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by AD_com at 2024-07-21 15:41:40
扩不出来就换引物，比摸索条件有意义，何况一件事情要是基础不好，再怎么掩饰都无济于事。...

好吧谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
8楼2024-07-23 18:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学员tll8Yk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 御风（远） at 2024-07-22 17:00:52
PCR起到关键作用的是引物和酶（本质），其他优化都是治标不治本，赶紧看看引物设计的质量。或者换酶（MIX也行）

好的谢谢

发自小木虫Android客户端
回复此楼
9楼2024-07-23 18:44:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YaVirology

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

试一试自己配一套PCR体系，加入一些DMSO和甜菜碱，具体配方论文里都有；

另外就是引物是不是太不特异了，我看杂带都很多，试着用NCBI Blast设计引物，让引物特异性高一些。
赞一下 回复此楼
10楼2024-07-28 20:20:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员tll8Yk 的主题更新
101/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +5 bjdxyxy 2026-08-26 5/250 2026-09-01 17:54 by 小伟大博士
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉？ +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭