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lihaoexe

银虫 (小有名气)

[交流] 如何给DNA片段加link

如题,我想在一些50-100bp之间的DNA片段两端加上一段序列,以便于筛选后做PCR。有没有公司做这样的服务的啊?急求!
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2009-10-22 13:59:
如题,我想在一些50-100bp之间的DNA片段两端加上一段序列,以便于筛选后做PCR。有没有公司做这样的服务的啊?急求!

直接做PCR检测不行吗?是不是你想在不同的序列上加上不同长度的序列以便于检测呢?
2楼2009-10-22 14:53:50
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-22 14:53:

直接做PCR检测不行吗?是不是你想在不同的序列上加上不同长度的序列以便于检测呢?

不行啊,我不知道片段的序列啊,而且我这是DNA片段的混合物,相当于一个文库,我是想在其中筛选出我所要的片段然后PCR,测序
3楼2009-10-22 15:35:19
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350784478

木虫 (正式写手)

照你这么一说,还是比较麻烦的。
朝为田舍郎,暮登天子堂。将相本无种,男儿当自强。
4楼2009-10-22 15:54:13
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
lihaoexe(金币+3,VIP+0):筛选不是问题,我有筛选方法,关键是筛选后用PCR把得到的DNA片段扩增 10-22 16:50
连T做单克隆怎么样?多筛重组子测序,估计工作量很大,而且你的片段也太短。
另外DGGE好像能够将长度一样,序列不一样的片段分离开,不知道可行不。

[ Last edited by susizheng on 2009-10-22 at 16:36 ]
Thank-you,so-blue.
5楼2009-10-22 16:34:28
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-22 16:34:
连T做单克隆怎么样?多筛重组子测序,估计工作量很大,而且你的片段也太短。
另外DGGE好像能够将长度一样,序列不一样的片段分离开,不知道可行不。

[ Last edited by susizheng on 2009-10-22 at 16:36 ]

筛选不是问题,我有筛选方法,关键是筛选后用PCR把得到的DNA片段扩增
6楼2009-10-22 16:50:03
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★ ★ ★
lihaoexe(金币+5,VIP+0): 10-22 17:12
你在片段两端加序列的目的是什么?筛选后,根据你所加的序列设计引物做PCR,将DNA片段扩增?
如果是这样的话,连T挑单克隆,富集本身也是你连进条带的扩增过程。
另外也可以以重组子为模板,利用T载通用引物,也可以扩增你的DNA片段。
不知道我这样理解正确不?
Thank-you,so-blue.
7楼2009-10-22 17:04:33
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-22 17:04:
你在片段两端加序列的目的是什么?筛选后,根据你所加的序列设计引物做PCR,将DNA片段扩增?
如果是这样的话,连T挑单克隆,富集本身也是你连进条带的扩增过程。
另外也可以以重组子为模板,利用T载通用引物,也 ...

首先,加序列的目的就是便于PCR。其次,用T载体的话,如果在筛选后连T载体,我筛选得到的DNA片段量实在太低不足以做链接,这也正是要PCR扩增的原因;如果是在筛选前连T载体,那么挑单克隆只能得到单一片段,不能筛选到我要的片段。不过还是谢谢你的建议
8楼2009-10-22 17:12:24
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

★ ★ ★
生命核心(金币+1,VIP+0):欢迎交流! 10-22 20:22
lihaoexe(金币+2,VIP+0): 10-22 22:49
你好像吧问题说的太复杂了,不知道你的意思是不是,你知道一段DNA的序列但不知道它前面的和后面的,现在你想知道?如果是这个样子的话,那很容易就会克隆到两头未知序列啊,你先回复我,是不是我说的这个意思,然后再跟你进一步讨论
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2009-10-22 19:52:51
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-10-22 19:52:
你好像吧问题说的太复杂了,不知道你的意思是不是,你知道一段DNA的序列但不知道它前面的和后面的,现在你想知道?如果是这个样子的话,那很容易就会克隆到两头未知序列啊,你先回复我,是不是我说的这个意思,然 ...

不是的,直接说就是我提取了基因组DNA,然后将其打断成了100bp左右的片段,我想在这些片段两端加一段已知序列。
不好意思,可能表述的太复杂了
10楼2009-10-22 20:25:23
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