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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


lihaoexe(金币+1,VIP+0): 10-22 22:49
引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2009-10-22 17:12:

首先,加序列的目的就是便于PCR。其次,用T载体的话,如果在筛选后连T载体,我筛选得到的DNA片段量实在太低不足以做链接,这也正是要PCR扩增的原因;如果是在筛选前连T载体,那么挑单克隆只能得到单一片段,不能 ...

楼主,照你的意思是说你筛片段要用特定的质粒,并且这个质粒的拷贝数不是很多,对吧?
11楼2009-10-22 21:56:13
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-22 21:56:

楼主,照你的意思是说你筛片段要用特定的质粒,并且这个质粒的拷贝数不是很多,对吧?

不是的,我是指筛选过程中只有极少量的片段是符合要求的才会保留下来,其他的都会筛掉。所以想要对留下来的片段PCR扩增一下,提高浓度,之后直接测序或者链接载体就都可以了
12楼2009-10-22 22:45:16
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alex688

铁虫 (初入文坛)

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lihaoexe(金币+17,VIP+0): 12-3 14:23
请楼主参照做基因组SELEX的方法,这方面的文章很多的,而且在Nature protocol上面专门有一篇关于genomic SELEX的,过程很详细。
13楼2009-12-03 11:59:17
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linxi8579

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我理解的是在未知片段两侧连上序列,以此来设计引物扩增后连T载体测序,对吧。好像在分子生物学的操作中是可以加酶切位点之类的东西的,还有加所谓的什么接头的,这在赵寿元的现代遗传学第二版最后一章好像讲过。不过在这样一个打碎的DNA片段库里,筛选你想要的很麻烦吧,你干脆都可以构建一个文库了。
14楼2009-12-03 18:35:37
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