如何给DNA片段加link - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

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lihaoexe(金币+1,VIP+0): 10-22 22:49

引用回帖:

Originally posted by lihaoexe at 2009-10-22 17:12:

首先，加序列的目的就是便于PCR。其次，用T载体的话，如果在筛选后连T载体，我筛选得到的DNA片段量实在太低不足以做链接，这也正是要PCR扩增的原因；如果是在筛选前连T载体，那么挑单克隆只能得到单一片段，不能 ...

楼主，照你的意思是说你筛片段要用特定的质粒，并且这个质粒的拷贝数不是很多，对吧？

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11楼2009-10-22 21:56:13

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lihaoexe

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-22 21:56:

楼主，照你的意思是说你筛片段要用特定的质粒，并且这个质粒的拷贝数不是很多，对吧？

不是的，我是指筛选过程中只有极少量的片段是符合要求的才会保留下来，其他的都会筛掉。所以想要对留下来的片段PCR扩增一下，提高浓度，之后直接测序或者链接载体就都可以了

12楼2009-10-22 22:45:16

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alex688

铁虫 (初入文坛)

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lihaoexe(金币+17,VIP+0): 12-3 14:23

请楼主参照做基因组SELEX的方法，这方面的文章很多的，而且在Nature protocol上面专门有一篇关于genomic SELEX的，过程很详细。

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13楼2009-12-03 11:59:17

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linxi8579

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流

我理解的是在未知片段两侧连上序列，以此来设计引物扩增后连T载体测序，对吧。好像在分子生物学的操作中是可以加酶切位点之类的东西的，还有加所谓的什么接头的，这在赵寿元的现代遗传学第二版最后一章好像讲过。不过在这样一个打碎的DNA片段库里，筛选你想要的很麻烦吧，你干脆都可以构建一个文库了。

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14楼2009-12-03 18:35:37

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