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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 如何给DNA片段加link
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lihaoexe

银虫 (小有名气)

[交流] 如何给DNA片段加link

如题，我想在一些50-100bp之间的DNA片段两端加上一段序列，以便于筛选后做PCR。有没有公司做这样的服务的啊？急求！
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1楼 2009-10-22 13:59:45
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lihaoexe at 2009-10-22 13:59:
如题，我想在一些50-100bp之间的DNA片段两端加上一段序列，以便于筛选后做PCR。有没有公司做这样的服务的啊？急求！

直接做PCR检测不行吗？是不是你想在不同的序列上加上不同长度的序列以便于检测呢？
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2楼2009-10-22 14:53:50
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lihaoexe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-10-22 14:53:

直接做PCR检测不行吗？是不是你想在不同的序列上加上不同长度的序列以便于检测呢？

不行啊，我不知道片段的序列啊，而且我这是DNA片段的混合物，相当于一个文库，我是想在其中筛选出我所要的片段然后PCR，测序
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3楼2009-10-22 15:35:19
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350784478

木虫 (正式写手)
照你这么一说，还是比较麻烦的。
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朝为田舍郎，暮登天子堂。将相本无种，男儿当自强。
4楼2009-10-22 15:54:13
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
lihaoexe(金币+3,VIP+0):筛选不是问题，我有筛选方法，关键是筛选后用PCR把得到的DNA片段扩增 10-22 16:50
连T做单克隆怎么样？多筛重组子测序，估计工作量很大，而且你的片段也太短。
另外DGGE好像能够将长度一样，序列不一样的片段分离开，不知道可行不。

[ Last edited by susizheng on 2009-10-22 at 16:36 ]
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Thank-you，so-blue.
5楼2009-10-22 16:34:28
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lihaoexe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-22 16:34:
连T做单克隆怎么样？多筛重组子测序，估计工作量很大，而且你的片段也太短。
另外DGGE好像能够将长度一样，序列不一样的片段分离开，不知道可行不。

[ Last edited by susizheng on 2009-10-22 at 16:36 ]

筛选不是问题，我有筛选方法，关键是筛选后用PCR把得到的DNA片段扩增
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6楼2009-10-22 16:50:03
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★ ★ ★
lihaoexe(金币+5,VIP+0): 10-22 17:12
你在片段两端加序列的目的是什么？筛选后，根据你所加的序列设计引物做PCR，将DNA片段扩增？
如果是这样的话，连T挑单克隆，富集本身也是你连进条带的扩增过程。
另外也可以以重组子为模板，利用T载通用引物，也可以扩增你的DNA片段。
不知道我这样理解正确不？
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Thank-you，so-blue.
7楼2009-10-22 17:04:33
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lihaoexe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-22 17:04:
你在片段两端加序列的目的是什么？筛选后，根据你所加的序列设计引物做PCR，将DNA片段扩增？
如果是这样的话，连T挑单克隆，富集本身也是你连进条带的扩增过程。
另外也可以以重组子为模板，利用T载通用引物，也 ...

首先，加序列的目的就是便于PCR。其次，用T载体的话，如果在筛选后连T载体，我筛选得到的DNA片段量实在太低不足以做链接，这也正是要PCR扩增的原因；如果是在筛选前连T载体，那么挑单克隆只能得到单一片段，不能筛选到我要的片段。不过还是谢谢你的建议
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8楼2009-10-22 17:12:24
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★ ★ ★
生命核心(金币+1,VIP+0):欢迎交流！ 10-22 20:22
lihaoexe(金币+2,VIP+0): 10-22 22:49
你好像吧问题说的太复杂了，不知道你的意思是不是，你知道一段DNA的序列但不知道它前面的和后面的，现在你想知道？如果是这个样子的话，那很容易就会克隆到两头未知序列啊，你先回复我，是不是我说的这个意思，然后再跟你进一步讨论
赞一下(10人) 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2009-10-22 19:52:51
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lihaoexe

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gyesang at 2009-10-22 19:52:
你好像吧问题说的太复杂了，不知道你的意思是不是，你知道一段DNA的序列但不知道它前面的和后面的，现在你想知道？如果是这个样子的话，那很容易就会克隆到两头未知序列啊，你先回复我，是不是我说的这个意思，然 ...

不是的，直接说就是我提取了基因组DNA，然后将其打断成了100bp左右的片段，我想在这些片段两端加一段已知序列。
不好意思，可能表述的太复杂了
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10楼2009-10-22 20:25:23
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