24小时热门版块排行榜    

查看: 581  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fanxing001

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR出现了非目的产物

各位,我做了一个PCR反应,如图,左边1至4分别为:1、空白对照(未加细菌DNA模板);2和3都为加入细菌DNA的反应体系;4、marker。我的目的产物是2、3中1500bp的条带(较亮的),为什么包括模板在内的三个PCR反应过程都在100bp(最下面的带)左右出现了一个较暗的带?是引物形成了二聚体导致的吗?另外,3号的亮带(1500bp左右)上下都有一片较亮的地方,这些是不是我的目的产物拖出来的啊?

[ Last edited by amisking on 2009-10-20 at 11:44 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhy0790707

铜虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
若是你的图片未做任何特殊处理,这样做的效果很不错了,最下面的是引物二聚体(属正常情况),3号1500处很亮,能看到一点拖尾也很正常,毕竟不能百分之百保证DNA完整,有碎片就有拖尾
7楼2009-10-27 12:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-20 11:44
小片段是引物二聚体,至于3号的较亮片段,我认为是你的模板,因为你是用DNA作模板的,提取过程中难以避免有些降解的小些的片段,可以少加点模板,增加循环数会好一点。没有关系,你把PCR产物切胶纯化就可以了
2楼2009-10-20 10:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanxing001

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-10-20 10:11:
小片段是引物二聚体,至于3号的较亮片段,我认为是你的模板,因为你是用DNA作模板的,提取过程中难以避免有些降解的小些的片段,可以少加点模板,增加循环数会好一点。没有关系,你把PCR产物切胶纯化就可以了

谢谢您的回答。我倒是考虑过引物二聚体,但是引物二聚体最大也应该只有40bp左右,看这条带的位置大约得100bp,这是仅是由于电泳的误差造成的呗?另外,您提到增加循环数,您的意思是进一步提高目的产物的量,进而掩盖住降解的小片段的亮度吗?
3楼2009-10-20 14:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
其实有一些拖尾对于实验没有很大的影响,因为毕竟PCR的目的产物需要纯化回收的,并且PCR的目的产物中也不仅仅是你的目的片段,还有一些像如没有得到完全延伸的片段等。
4楼2009-10-20 22:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学308分求调剂 +3 你好明天你好 2026-03-23 3/150 2026-03-23 20:11 by macy2011
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +7 生物工程调剂 2026-03-17 12/600 2026-03-23 18:18 by YMU施老师
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 323求调剂 +6 洼小桶 2026-03-18 6/300 2026-03-23 00:29 by king123!
[考博] 招收博士1-2人 +3 QGZDSYS 2026-03-18 4/200 2026-03-22 10:25 by QGZDSYS
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂! +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 Ma_xt 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:05 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考博] 申博26年 +3 八6八68 2026-03-19 3/150 2026-03-19 19:43 by nxgogo
信息提示
请填处理意见