应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR出现了非目的产物
汕头大学海洋科学接受调剂
71/1返回列表
查看: 606  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

fanxing001

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR出现了非目的产物

各位，我做了一个PCR反应，如图，左边1至4分别为：1、空白对照（未加细菌DNA模板）；2和3都为加入细菌DNA的反应体系；4、marker。我的目的产物是2、3中1500bp的条带（较亮的），为什么包括模板在内的三个PCR反应过程都在100bp（最下面的带）左右出现了一个较暗的带？是引物形成了二聚体导致的吗？另外，3号的亮带（1500bp左右）上下都有一片较亮的地方，这些是不是我的目的产物拖出来的啊？

[ Last edited by amisking on 2009-10-20 at 11:44 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-10-19 23:42:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-20 11:44
小片段是引物二聚体，至于3号的较亮片段，我认为是你的模板，因为你是用DNA作模板的，提取过程中难以避免有些降解的小些的片段，可以少加点模板，增加循环数会好一点。没有关系，你把PCR产物切胶纯化就可以了
赞一下(21人) 回复此楼
2楼2009-10-20 10:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanxing001

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-10-20 10:11:
小片段是引物二聚体，至于3号的较亮片段，我认为是你的模板，因为你是用DNA作模板的，提取过程中难以避免有些降解的小些的片段，可以少加点模板，增加循环数会好一点。没有关系，你把PCR产物切胶纯化就可以了

谢谢您的回答。我倒是考虑过引物二聚体，但是引物二聚体最大也应该只有40bp左右，看这条带的位置大约得100bp，这是仅是由于电泳的误差造成的呗？另外，您提到增加循环数，您的意思是进一步提高目的产物的量，进而掩盖住降解的小片段的亮度吗？
赞一下 回复此楼
3楼2009-10-20 14:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
其实有一些拖尾对于实验没有很大的影响，因为毕竟PCR的目的产物需要纯化回收的，并且PCR的目的产物中也不仅仅是你的目的片段，还有一些像如没有得到完全延伸的片段等。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-10-20 22:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我可以担保你这种质量的PCR产物即使不纯化直接做克隆都没问题.已经很好了. 下面的确实是引物二聚体,就是那么大.托尾很正常,一点影响都没有. 用热启动酶托尾会少些，但没必要。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-10-20 23:34:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yinhuali123

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个没事的，有你目的带，去凝胶回收你的片段就行了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-10-25 21:03:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhy0790707

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
若是你的图片未做任何特殊处理，这样做的效果很不错了，最下面的是引物二聚体（属正常情况），3号1500处很亮，能看到一点拖尾也很正常，毕竟不能百分之百保证DNA完整，有碎片就有拖尾
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2009-10-27 12:01:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 fanxing001 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 335求调剂 +19 想上岸呀！！ 2026-04-12 20/1000 2026-04-14 13:32 by 第一天好
[考研] 300分求调剂 （085501机械专硕，本科扬大） +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu～
[考研] 本科西工大 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-13 23:08 by pies112
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +13 drizzle_9 2026-04-12 14/700 2026-04-13 10:26 by Faiz5552
[考研] 314求调剂 +24 wakeluofu 2026-04-09 25/1250 2026-04-13 08:58 by lhj2009
[考研] 求调剂 +16 张番茄不炒蛋 2026-04-10 17/850 2026-04-12 13:58 by 熬夜成！
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +5 弱水听文 2026-04-09 5/250 2026-04-12 13:16 by shengxi123
[考研] 电气专硕320求调剂 +6 小麻子111 2026-04-10 6/300 2026-04-12 10:54 by lemon6009
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-09 12/600 2026-04-12 10:32 by 逆水乘风
[考研] 22408调剂315分 +3 zhuangyan123 2026-04-09 3/150 2026-04-12 00:25 by 蓝云思雨
[考研] 0859，337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 11:34 by caotw2020
[考研] 297求调剂 +9 Kwgyz 2026-04-09 9/450 2026-04-11 10:09 by zhq0425
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 263能源动力专硕求调剂 +4 加大号饭盒袋 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:52 by gong120082
[考研] 求调剂 +5 不会飞的鱼@ 2026-04-10 5/250 2026-04-10 19:07 by chemisry
[考研] 考研调剂-材料类-284 +28 想换手机不想解� 2026-04-08 28/1400 2026-04-09 20:08 by 倒数321?
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考研] 085400电子信息类（川大控制工程）求调剂可跨专业 求老师联系 +3 626776879 2026-04-08 3/150 2026-04-09 16:05 by 猪会飞
[考研] 349学科化学045106求调剂，化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 招收有机化学、化工，药学，食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭