24小时热门版块排行榜    

查看: 580  |  回复: 6
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

fanxing001

铜虫 (小有名气)

[交流] PCR出现了非目的产物

各位,我做了一个PCR反应,如图,左边1至4分别为:1、空白对照(未加细菌DNA模板);2和3都为加入细菌DNA的反应体系;4、marker。我的目的产物是2、3中1500bp的条带(较亮的),为什么包括模板在内的三个PCR反应过程都在100bp(最下面的带)左右出现了一个较暗的带?是引物形成了二聚体导致的吗?另外,3号的亮带(1500bp左右)上下都有一片较亮的地方,这些是不是我的目的产物拖出来的啊?

[ Last edited by amisking on 2009-10-20 at 11:44 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
其实有一些拖尾对于实验没有很大的影响,因为毕竟PCR的目的产物需要纯化回收的,并且PCR的目的产物中也不仅仅是你的目的片段,还有一些像如没有得到完全延伸的片段等。
4楼2009-10-20 22:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

bioxixi

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+2,VIP+0): 10-20 11:44
小片段是引物二聚体,至于3号的较亮片段,我认为是你的模板,因为你是用DNA作模板的,提取过程中难以避免有些降解的小些的片段,可以少加点模板,增加循环数会好一点。没有关系,你把PCR产物切胶纯化就可以了
2楼2009-10-20 10:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fanxing001

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by bioxixi at 2009-10-20 10:11:
小片段是引物二聚体,至于3号的较亮片段,我认为是你的模板,因为你是用DNA作模板的,提取过程中难以避免有些降解的小些的片段,可以少加点模板,增加循环数会好一点。没有关系,你把PCR产物切胶纯化就可以了

谢谢您的回答。我倒是考虑过引物二聚体,但是引物二聚体最大也应该只有40bp左右,看这条带的位置大约得100bp,这是仅是由于电泳的误差造成的呗?另外,您提到增加循环数,您的意思是进一步提高目的产物的量,进而掩盖住降解的小片段的亮度吗?
3楼2009-10-20 14:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

michaelwuqingyu

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我可以担保你这种质量的PCR产物即使不纯化直接做克隆都没问题.已经很好了. 下面的确实是引物二聚体,就是那么大.托尾很正常,一点影响都没有. 用热启动酶托尾会少些,但没必要。
5楼2009-10-20 23:34:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪!?!
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 070300,一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +4 niko- 2026-03-22 4/200 2026-03-23 07:56 by Iveryant
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分,一志愿四川大学,诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +12 yangfz 2026-03-17 12/600 2026-03-21 03:30 by JourneyLucky
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +4 小材化本科 2026-03-18 4/200 2026-03-20 23:13 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +7 司空. 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:08 by JourneyLucky
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
信息提示
请填处理意见