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fanxing001

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[交流] PCR出现了非目的产物

各位，我做了一个PCR反应，如图，左边1至4分别为：1、空白对照（未加细菌DNA模板）；2和3都为加入细菌DNA的反应体系；4、marker。我的目的产物是2、3中1500bp的条带（较亮的），为什么包括模板在内的三个PCR反应过程都在100bp（最下面的带）左右出现了一个较暗的带？是引物形成了二聚体导致的吗？另外，3号的亮带（1500bp左右）上下都有一片较亮的地方，这些是不是我的目的产物拖出来的啊？

[ Last edited by amisking on 2009-10-20 at 11:44 ]

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1楼2009-10-19 23:42:50

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bioxixi

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amisking(金币+2,VIP+0): 10-20 11:44

小片段是引物二聚体，至于3号的较亮片段，我认为是你的模板，因为你是用DNA作模板的，提取过程中难以避免有些降解的小些的片段，可以少加点模板，增加循环数会好一点。没有关系，你把PCR产物切胶纯化就可以了

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2楼2009-10-20 10:11:01

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fanxing001

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引用回帖:

Originally posted by bioxixi at 2009-10-20 10:11:
小片段是引物二聚体，至于3号的较亮片段，我认为是你的模板，因为你是用DNA作模板的，提取过程中难以避免有些降解的小些的片段，可以少加点模板，增加循环数会好一点。没有关系，你把PCR产物切胶纯化就可以了

谢谢您的回答。我倒是考虑过引物二聚体，但是引物二聚体最大也应该只有40bp左右，看这条带的位置大约得100bp，这是仅是由于电泳的误差造成的呗？另外，您提到增加循环数，您的意思是进一步提高目的产物的量，进而掩盖住降解的小片段的亮度吗？

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3楼2009-10-20 14:53:03

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