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匿名

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zhuifeng7000

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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-18 15:34:

有个疑问,我看别人做融合表达的时候需要将第一个基因的终止密码子突变,做共表达需要在第二个基因前加上启动子.

在T7启动子的调控下,翻译由pET载体上的ATG开始翻译(不是从你设计引物上ATG开始),如果在目 ...

T7是一种强启动子,并不是一个启动子只能启动一个基因,就像一个操纵子,同一个启动子可以启动多个基因。有时一个启动子过强,需要加两个终止子才能将其终止的。不知道说的对不对?
12楼2009-10-18 16:43:10
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)


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你一定要在上游加个Nco1吗?Nco1中有个ATG起始密码子,很可能会使的阅读框错读,影响你的表达。
2楼2009-10-17 20:40:50
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gyesang

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1、你想怎么个克隆法,先把基因克隆到T载体上呢,还是直接切PCR产物,装到pET载体上?如果先克隆到T载体上你就用不着加保护碱基,如果想直接酶切PCR产物,然后装pET载体,就要加保护碱基了,至少3个,一般为3个
2、 pET有pET28和pET32系列,每种又有abc(+)-之分,要根据你所用的是哪一个载体,才有可能考虑是否对读码框的问题,也就是蛋白在翻译的时候跟标签是in-frame-translation的,你把问题补充完整再帮你看啊
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2009-10-17 20:41:43
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匿名

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4楼2009-10-17 21:04:12
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