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匿名

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1楼 2009-10-17 20:25:18
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zhuifeng7000

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引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2009-10-18 15:34:

有个疑问，我看别人做融合表达的时候需要将第一个基因的终止密码子突变，做共表达需要在第二个基因前加上启动子.

在T7启动子的调控下，翻译由pET载体上的ATG开始翻译（不是从你设计引物上ATG开始），如果在目 ...

T7是一种强启动子，并不是一个启动子只能启动一个基因，就像一个操纵子，同一个启动子可以启动多个基因。有时一个启动子过强，需要加两个终止子才能将其终止的。不知道说的对不对？
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12楼2009-10-18 16:43:10
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
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你一定要在上游加个Nco1吗？Nco1中有个ATG起始密码子，很可能会使的阅读框错读，影响你的表达。
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2楼2009-10-17 20:40:50
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gyesang

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1、你想怎么个克隆法，先把基因克隆到T载体上呢，还是直接切PCR产物，装到pET载体上？如果先克隆到T载体上你就用不着加保护碱基，如果想直接酶切PCR产物，然后装pET载体，就要加保护碱基了，至少3个，一般为3个
2、 pET有pET28和pET32系列，每种又有abc(+)-之分，要根据你所用的是哪一个载体，才有可能考虑是否对读码框的问题，也就是蛋白在翻译的时候跟标签是in-frame-translation的，你把问题补充完整再帮你看啊
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3楼2009-10-17 20:41:43
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匿名

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4楼2009-10-17 21:04:12
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