应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助小蛋白如何电泳检测
汕头大学海洋科学接受调剂
111/2返回列表12下一页
查看: 755  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xj22667

银虫 (小有名气)

[交流] 求助小蛋白如何电泳检测

最近做蛋白的表达纯化，但苦于蛋白较小不到20KD，每次15%的SDS-PAGE跑一个小时就糊了，看不清目的带，但western检测已经诱导出来，但看不到目的带无法后续纯化，望有经验的虫友们不吝赐教！不胜感激

[ Last edited by xj22667 on 2009-10-17 at 17:35 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-10-17 17:26:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可以跑一下tricne-page，小分子量的蛋白用这个方法比较好
赞一下(1人) 回复此楼
I am not a hero , but I served with heroes！
2楼2009-10-17 18:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wlt728 at 2009-10-17 18:57:
你可以跑一下tricne-page，小分子量的蛋白用这个方法比较好

请问您跑过么 效果则们样
赞一下 回复此楼
3楼2009-10-17 18:59:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
没跑过，我们的蛋白分子量比较大些，论坛里有关于我说的方法。你可以搜下！自己好好看下！
赞一下(1人) 回复此楼
I am not a hero , but I served with heroes！
4楼2009-10-17 19:53:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3,VIP+0): 10-19 20:21
小分子肯定要用tricine-SDS-PAGE啊，没有选择的。
和SDS-PAGE相比，只是胶的成分和缓冲液不一样，都很简单的，没什么神秘的。
楼主就大胆的做吧。
给楼主一个protocol。

Tricine SDS-PAGE电泳
1、Gel buffer
Tris36.33g，SDS 0.3g，加适量水，调pH至8.45，定容至100ml。
2、阳极缓冲液
Tris 12.1g，pH8.9
3、阴极缓冲液
Tris 6.05g，tricine 8.96g，SDS 0.5g，定容至500ml，可不调pH，即8.0。
4、配方
        15％分离胶（ml）        浓缩胶（ml）
Gel buffer                3.33                                1
ddH2O                0.5                               2.2
30%丙烯酰胺     5                               0.8
甘油              1.06                                 0
10%过硫酸铵     0.1                              0.05
TEMED                0.005             0.005
赞一下(21人) 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
5楼2009-10-17 20:10:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
还有楼主是不是sds-page电泳有问题啊？
我自己做，用的marker最小是10KD的，每次电泳这个最小的marker带都跑出来很好看。没什么问题。我做蛋白质酶切，切下来的小片段也可以清楚检测。我用的也是15%的胶。
赞一下 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
6楼2009-10-17 20:13:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xj22667

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2009-10-17 20:10:
小分子肯定要用tricine-SDS-PAGE啊，没有选择的。
和SDS-PAGE相比，只是胶的成分和缓冲液不一样，都很简单的，没什么神秘的。
楼主就大胆的做吧。
给楼主一个protocol。

Tricine SDS-PAGE电泳
1、Gel buff ...

谢谢你的建议！这个配方您试过吗  小蛋白液能跑的很清楚吗
你做小蛋白也用这种方法吗？
赞一下 回复此楼
7楼2009-10-19 19:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nn0808

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 10-19 20:21
也可以用凝胶柱检测啊.先做标准曲线,然后上待测样,一比较就可以了,只是费用较高.当然也可以送检了,江南大学就可以检测,400块一个样.
赞一下(21人) 回复此楼
8楼2009-10-19 20:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jessica533

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我纯化的3个蛋白均在14.4KD左右，用12%的PAGE胶跑出来效果就很好 200V电压大约跑40min
赞一下(1人) 回复此楼
把忧愁微掉，将快乐积起。
9楼2009-10-19 21:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我给的protocol都是我自己做过的。
我还是觉得用普通15%应该可以跑出来。你再检查一下你的电泳系统啊。
小分子电泳一般是针对肽来的。
赞一下(1人) 回复此楼
VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
10楼2009-10-19 22:22:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xj22667 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研求调剂 +10 子木呐 2026-04-12 10/500 2026-04-13 17:28 by wulijun2012
[基金申请] 有爆料，一个青年教师卖房得400万，然后换了一个四青帽子 +11 babu2015 2026-04-08 11/550 2026-04-13 16:33 by probebill
[考研] 调剂 +26 不逢春 2026-04-07 27/1350 2026-04-13 14:24 by 张zhihao
[教师之家] 转长聘了 +3 简单化xn 2026-04-13 3/150 2026-04-13 14:18 by wwwkkk83
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +3 河南农业大学-能 2026-04-12 3/150 2026-04-13 12:44 by 木鱼.
[基金申请] 2026 WR青拔 +3 liuchb715 2026-04-09 5/250 2026-04-13 08:46 by 小_小_白虫
[考研] 326求调剂 +6 Shansyn 2026-04-10 6/300 2026-04-12 09:46 by hammer3
[考研] 计算机22408 281分，求调剂 +7 17715607211 2026-04-06 7/350 2026-04-12 00:43 by xuxiang
[考研] 一志愿郑州大学 22408 305分求调剂 +5 安小满zzz 2026-04-08 5/250 2026-04-12 00:41 by 蓝云思雨
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考研] 301求调剂 +5 149. 2026-04-10 5/250 2026-04-10 15:45 by 柴小白
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考博] 博士自荐 +7 可可小胖 2026-04-08 7/350 2026-04-10 08:28 by kimhero
[考研] 材料化工总分334求调剂 +16 Riot2025 2026-04-08 17/850 2026-04-09 20:19 by maddjdld
[考研] 一志愿武理车辆 281 求调剂 +5 上岸研究生. 2026-04-07 5/250 2026-04-09 15:56 by only周
[考研] 349学科化学045106求调剂，化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 材料工程322 +18 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 19/950 2026-04-09 10:44 by cymywx
[考研] 生物学328分求调剂 +9 闪电kkl 2026-04-08 10/500 2026-04-08 21:42 by liuhuiying09
[考研] 259求调剂 +5 就爱吃土豆呀呀 2026-04-07 5/250 2026-04-07 22:40 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭