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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助小蛋白如何电泳检测
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xj22667

银虫 (小有名气)

[交流] 求助小蛋白如何电泳检测

最近做蛋白的表达纯化，但苦于蛋白较小不到20KD，每次15%的SDS-PAGE跑一个小时就糊了，看不清目的带，但western检测已经诱导出来，但看不到目的带无法后续纯化，望有经验的虫友们不吝赐教！不胜感激

[ Last edited by xj22667 on 2009-10-17 at 17:35 ]
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1楼 2009-10-17 17:26:21
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
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你可以跑一下tricne-page，小分子量的蛋白用这个方法比较好
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2楼2009-10-17 18:57:52
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xj22667

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wlt728 at 2009-10-17 18:57:
你可以跑一下tricne-page，小分子量的蛋白用这个方法比较好

请问您跑过么 效果则们样
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3楼2009-10-17 18:59:50
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
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没跑过，我们的蛋白分子量比较大些，论坛里有关于我说的方法。你可以搜下！自己好好看下！
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4楼2009-10-17 19:53:11
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-19 20:21
小分子肯定要用tricine-SDS-PAGE啊，没有选择的。
和SDS-PAGE相比，只是胶的成分和缓冲液不一样，都很简单的，没什么神秘的。
楼主就大胆的做吧。
给楼主一个protocol。

Tricine SDS-PAGE电泳
1、Gel buffer
Tris36.33g，SDS 0.3g，加适量水，调pH至8.45，定容至100ml。
2、阳极缓冲液
Tris 12.1g，pH8.9
3、阴极缓冲液
Tris 6.05g，tricine 8.96g，SDS 0.5g，定容至500ml，可不调pH，即8.0。
4、配方
        15％分离胶（ml）        浓缩胶（ml）
Gel buffer                3.33                                1
ddH2O                0.5                               2.2
30%丙烯酰胺     5                               0.8
甘油              1.06                                 0
10%过硫酸铵     0.1                              0.05
TEMED                0.005             0.005
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
5楼2009-10-17 20:10:50
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
还有楼主是不是sds-page电泳有问题啊？
我自己做，用的marker最小是10KD的，每次电泳这个最小的marker带都跑出来很好看。没什么问题。我做蛋白质酶切，切下来的小片段也可以清楚检测。我用的也是15%的胶。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
6楼2009-10-17 20:13:38
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xj22667

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by snoopyzxx at 2009-10-17 20:10:
小分子肯定要用tricine-SDS-PAGE啊，没有选择的。
和SDS-PAGE相比，只是胶的成分和缓冲液不一样，都很简单的，没什么神秘的。
楼主就大胆的做吧。
给楼主一个protocol。

Tricine SDS-PAGE电泳
1、Gel buff ...

谢谢你的建议！这个配方您试过吗  小蛋白液能跑的很清楚吗
你做小蛋白也用这种方法吗？
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7楼2009-10-19 19:44:40
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nn0808

银虫 (小有名气)
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amisking(金币+1,VIP+0): 10-19 20:21
也可以用凝胶柱检测啊.先做标准曲线,然后上待测样,一比较就可以了,只是费用较高.当然也可以送检了,江南大学就可以检测,400块一个样.
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8楼2009-10-19 20:17:57
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jessica533

新虫 (小有名气)
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我纯化的3个蛋白均在14.4KD左右，用12%的PAGE胶跑出来效果就很好 200V电压大约跑40min
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把忧愁微掉，将快乐积起。
9楼2009-10-19 21:07:32
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)
★
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我给的protocol都是我自己做过的。
我还是觉得用普通15%应该可以跑出来。你再检查一下你的电泳系统啊。
小分子电泳一般是针对肽来的。
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VX：19192310212；公众号：生物技术与IVD
10楼2009-10-19 22:22:15
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