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求助小蛋白如何电泳检测
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最近做蛋白的表达纯化，但苦于蛋白较小不到20KD，每次15%的SDS-PAGE跑一个小时就糊了，看不清目的带，但western检测已经诱导出来，但看不到目的带无法后续纯化，望有经验的虫友们不吝赐教！不胜感激 [ Last edited by xj22667 on 2009-10-17 at 17:35 ] |
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snoopyzxx
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小分子肯定要用tricine-SDS-PAGE啊，没有选择的。 和SDS-PAGE相比，只是胶的成分和缓冲液不一样，都很简单的，没什么神秘的。 楼主就大胆的做吧。 给楼主一个protocol。 Tricine SDS-PAGE电泳 1、Gel buffer Tris36.33g，SDS 0.3g，加适量水，调pH至8.45，定容至100ml。 2、阳极缓冲液 Tris 12.1g，pH8.9 3、阴极缓冲液 Tris 6.05g，tricine 8.96g，SDS 0.5g，定容至500ml，可不调pH，即8.0。 4、配方 15％分离胶（ml） 浓缩胶（ml） Gel buffer 3.33 1 ddH2O 0.5 2.2 30%丙烯酰胺 5 0.8 甘油 1.06 0 10%过硫酸铵 0.1 0.05 TEMED 0.005 0.005 |
5楼2009-10-17 20:10:50
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