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汕头大学海洋科学接受调剂
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xj22667

银虫 (小有名气)

[交流] 求助小蛋白如何电泳检测

最近做蛋白的表达纯化,但苦于蛋白较小不到20KD,每次15%的SDS-PAGE跑一个小时就糊了,看不清目的带,但western检测已经诱导出来,但看不到目的带无法后续纯化,望有经验的虫友们不吝赐教!不胜感激

[ Last edited by xj22667 on 2009-10-17 at 17:35 ]
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

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amisking(金币+3,VIP+0): 10-19 20:21
小分子肯定要用tricine-SDS-PAGE啊,没有选择的。
和SDS-PAGE相比,只是胶的成分和缓冲液不一样,都很简单的,没什么神秘的。
楼主就大胆的做吧。
给楼主一个protocol。

Tricine SDS-PAGE电泳
1、Gel buffer
Tris36.33g,SDS 0.3g,加适量水,调pH至8.45,定容至100ml。
2、阳极缓冲液
Tris 12.1g,pH8.9
3、阴极缓冲液
Tris 6.05g,tricine 8.96g,SDS 0.5g,定容至500ml,可不调pH,即8.0。
4、配方
        15%分离胶(ml)        浓缩胶(ml)
Gel buffer                3.33                                1
ddH2O                0.5                               2.2
30%丙烯酰胺     5                               0.8
甘油              1.06                                 0
10%过硫酸铵     0.1                              0.05
TEMED                0.005             0.005
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
5楼2009-10-17 20:10:50
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你可以跑一下tricne-page,小分子量的蛋白用这个方法比较好
I am not a hero , but I served with heroes!
2楼2009-10-17 18:57:52
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xj22667

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by wlt728 at 2009-10-17 18:57:
你可以跑一下tricne-page,小分子量的蛋白用这个方法比较好

请问您跑过么 效果则们样
3楼2009-10-17 18:59:50
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
没跑过,我们的蛋白分子量比较大些,论坛里有关于我说的方法。你可以搜下!自己好好看下!
I am not a hero , but I served with heroes!
4楼2009-10-17 19:53:11
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