24小时热门版块排行榜    

查看: 1799  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么我的融合PCR总是失败 已有2人参与

各位大佬,有人知道融合PCR具体怎么做好吗,重叠部分大概多长合适,然后两条模板的量大概要加多少,比如50ul体系,200ng/ul的1000bp的模板应该加多少,预反应的话有什么注意的

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

泡沫12

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by zljg8260 at 2023-04-26 00:12:16
预反应的退火温度是根据重叠部分来吗
...

退火温度我一直用的55度,都是可以融合成功的,三个片段也是可以的

发自小木虫IOS客户端
6楼2023-04-26 21:03:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

泡沫12

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
A和B片段我一般overlap 30 bp,50ul体系各加200ng,不加引物,PCR 10个循环,之后取2ul做模板,各加1.5ul上下游引物,进行PCR

发自小木虫IOS客户端
2楼2023-04-25 23:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Glenice Y

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个实验要注意的细节很多,尤其是同源臂的设计长度,一般我是按照1:1加  这时候你要按照长度计算,加入量的确定,其实一般很少的量就可以了10ng这样子

发自小木虫Android客户端
3楼2023-04-25 23:56:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 泡沫12 at 2023-04-25 23:16:04
A和B片段我一般overlap 30 bp,50ul体系各加200ng,不加引物,PCR 10个循环,之后取2ul做模板,各加1.5ul上下游引物,进行PCR

预反应的退火温度是根据重叠部分来吗

发自小木虫Android客户端
4楼2023-04-26 00:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 08:28 by xiangy672
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见