应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 为什么我的融合PCR总是失败
51/1返回列表
查看: 1366  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么我的融合PCR总是失败 已有2人参与

各位大佬，有人知道融合PCR具体怎么做好吗，重叠部分大概多长合适，然后两条模板的量大概要加多少，比如50ul体系，200ng/ul的1000bp的模板应该加多少，预反应的话有什么注意的

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2023-04-25 22:29:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 泡沫12 at 2023-04-25 23:16:04
A和B片段我一般overlap 30 bp，50ul体系各加200ng，不加引物，PCR 10个循环，之后取2ul做模板，各加1.5ul上下游引物，进行PCR

预反应的退火温度是根据重叠部分来吗

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2023-04-26 00:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

泡沫12

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
A和B片段我一般overlap 30 bp，50ul体系各加200ng，不加引物，PCR 10个循环，之后取2ul做模板，各加1.5ul上下游引物，进行PCR

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2023-04-25 23:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Glenice Y

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个实验要注意的细节很多，尤其是同源臂的设计长度，一般我是按照1:1加  这时候你要按照长度计算，加入量的确定，其实一般很少的量就可以了10ng这样子

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2023-04-25 23:56:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Glenice Y at 2023-04-25 23:56:41
这个实验要注意的细节很多，尤其是同源臂的设计长度，一般我是按照1:1加  这时候你要按照长度计算，加入量的确定，其实一般很少的量就可以了10ng这样子

我两边各20，所以有40的同源臂，加的量的话确实按摩尔比一比一来的，但加的挺多，50ul体系加了有一千多ng1000bp的片段

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2023-04-26 00:14:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 标题:捡漏预警|08工科/09农学调剂!英语要求低，过线即有机会! +4 马超放烟花 2026-03-07 4/200 2026-03-09 23:54 by 拾三同学
[考研] 材料学学硕308分/本科东北大学/一志愿西北工业大学/ 5+3 苏尧幺幺 2026-03-03 9/450 2026-03-09 14:43 by ruiyingmiao
[考研] 0703化学求调剂 +4 很老实人 2026-03-09 4/200 2026-03-09 13:38 by macy2011
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-08 6/300 2026-03-09 11:49 by 勇敢太监王公公
[考研] 材料调剂 +4 xxxcm 2026-03-08 7/350 2026-03-09 10:11 by EBSD
[考研] 293一志愿华东理工 0817化学工程与技术 调剂 +5 fjj0912 2026-03-07 5/250 2026-03-09 09:13 by 30660438
[考研] 一志愿武理314求调剂 +4 （￣～￣;） 2026-03-08 5/250 2026-03-08 23:12 by L135790
[考研] 一志愿中科大能动297求调剂，本科川大 +4 邵11 2026-03-03 4/200 2026-03-08 20:16 by xiongyaxuan
[考研] 材料化工求调剂 +7 博斯特525 2026-03-06 8/400 2026-03-08 03:51 by lfhuang
[考研] 0307化学求调剂 +6 0ok0k 2026-03-07 6/300 2026-03-07 20:10 by pies112
[考研] 一志愿哈尔滨工业大学0856材料与化工，前三科206，总分283，求调剂 +7 26考研求调剂 2026-03-06 7/350 2026-03-07 14:49 by Miko19
[考研] 085600材料与化工 298 调剂 +11 小西笑嘻嘻 2026-03-03 11/550 2026-03-07 10:30 by 一直走不要停
[考研] 085600材料与化工 292分 求调剂 +6 程晴之 2026-03-06 6/300 2026-03-07 09:22 by 斩魂滴兔子！
[考研] 复试调剂 +7 呼呼？~+123456 2026-03-05 10/500 2026-03-06 16:07 by @飒飒飒飒
[考研] 085600材料与化工（高分子）290分求调剂 +9 wengyujian 2026-03-04 9/450 2026-03-06 15:59 by 聪明的大松鼠
[考研] 材料工程调剂 +6 zbcm_zbcm 2026-03-05 6/300 2026-03-06 15:36 by @飒飒飒飒
[考研] 332材料求调剂 +6 zjy101327 2026-03-05 7/350 2026-03-06 00:18 by wutongshun
[考研] 求材料调剂 +4 berdmond 2026-03-05 4/200 2026-03-05 19:45 by 黑衣馒头人
[考研] 274环境工程求调剂 +6 扶柳盈江 2026-03-05 6/300 2026-03-05 13:16 by 梦天888
[考研] 325求调剂 +5 学家科 2026-03-04 5/250 2026-03-04 14:04 by kakakapanpan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭