24小时热门版块排行榜    

查看: 1347  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么我的融合PCR总是失败 已有2人参与

各位大佬,有人知道融合PCR具体怎么做好吗,重叠部分大概多长合适,然后两条模板的量大概要加多少,比如50ul体系,200ng/ul的1000bp的模板应该加多少,预反应的话有什么注意的

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Glenice Y at 2023-04-25 23:56:41
这个实验要注意的细节很多,尤其是同源臂的设计长度,一般我是按照1:1加  这时候你要按照长度计算,加入量的确定,其实一般很少的量就可以了10ng这样子

我两边各20,所以有40的同源臂,加的量的话确实按摩尔比一比一来的,但加的挺多,50ul体系加了有一千多ng1000bp的片段

发自小木虫Android客户端
5楼2023-04-26 00:14:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

泡沫12

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
A和B片段我一般overlap 30 bp,50ul体系各加200ng,不加引物,PCR 10个循环,之后取2ul做模板,各加1.5ul上下游引物,进行PCR

发自小木虫IOS客户端
2楼2023-04-25 23:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Glenice Y

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个实验要注意的细节很多,尤其是同源臂的设计长度,一般我是按照1:1加  这时候你要按照长度计算,加入量的确定,其实一般很少的量就可以了10ng这样子

发自小木虫Android客户端
3楼2023-04-25 23:56:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 泡沫12 at 2023-04-25 23:16:04
A和B片段我一般overlap 30 bp,50ul体系各加200ng,不加引物,PCR 10个循环,之后取2ul做模板,各加1.5ul上下游引物,进行PCR

预反应的退火温度是根据重叠部分来吗

发自小木虫Android客户端
4楼2023-04-26 00:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +3 驰光绝景 2026-03-04 3/150 2026-03-05 20:24 by 热情沙漠
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +10 pin8023 2026-02-28 13/650 2026-03-05 18:54 by 3367308522
[考研] 一志愿314求调剂 +7 202111120625 2026-03-03 7/350 2026-03-04 15:56 by zhukairuo
[考研] 一志愿西交大材料学硕 346 求调剂 +3 zju51 2026-03-04 3/150 2026-03-04 13:01 by zhukairuo
[考研] 331求调剂 +3 zzZ&zZ 2026-03-03 3/150 2026-03-04 10:37 by aaa显卡批发王总
[考研] 材料325求调剂 30+5 mariusuki 2026-03-02 10/500 2026-03-04 09:24 by njzyff
[考研] 材料工程269求调剂 +7 白刺玫 2026-03-02 7/350 2026-03-04 08:47 by zhyzzh
[考研] 环境工程学硕288求助调剂 +7 多吃亿口芝士 2026-03-02 7/350 2026-03-03 23:00 by zhukairuo
[考博] 26申博 求博导 +3 爱读书的小帅 2026-02-28 5/250 2026-03-03 22:17 by 远方13579
[考研] 一志愿东北大学化学314分求调剂 +5 lr1212.. 2026-03-02 5/250 2026-03-03 15:26 by xingtian2025
[考研] 278求调剂 +3 满天星11_22 2026-03-02 3/150 2026-03-03 13:51 by Iveryant
[考研] 268求调剂 +6 好运连绵不绝 2026-03-02 6/300 2026-03-03 13:03 by 秋收
[考研] 298求调剂 +7 axyz3 2026-02-28 8/400 2026-03-03 06:11 by tgxtgxtgx9
[考研] 求调剂 +11 yunziaaaaa 2026-03-01 13/650 2026-03-02 21:59 by sunny81
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +5 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 9/450 2026-03-02 21:33 by sunny81
[考研] 0856材料调剂 +5 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 5/250 2026-03-02 20:31 by hypershenger
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +15 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 15/750 2026-03-02 20:13 by hypershenger
[考研] 材料调剂 +3 恒顺自然 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:49 by L135790
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
信息提示
请填处理意见