24小时热门版块排行榜    

查看: 1373  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

[交流] 为什么我的融合PCR总是失败 已有2人参与

各位大佬,有人知道融合PCR具体怎么做好吗,重叠部分大概多长合适,然后两条模板的量大概要加多少,比如50ul体系,200ng/ul的1000bp的模板应该加多少,预反应的话有什么注意的

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Glenice Y at 2023-04-25 23:56:41
这个实验要注意的细节很多,尤其是同源臂的设计长度,一般我是按照1:1加  这时候你要按照长度计算,加入量的确定,其实一般很少的量就可以了10ng这样子

我两边各20,所以有40的同源臂,加的量的话确实按摩尔比一比一来的,但加的挺多,50ul体系加了有一千多ng1000bp的片段

发自小木虫Android客户端
5楼2023-04-26 00:14:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

泡沫12

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
A和B片段我一般overlap 30 bp,50ul体系各加200ng,不加引物,PCR 10个循环,之后取2ul做模板,各加1.5ul上下游引物,进行PCR

发自小木虫IOS客户端
2楼2023-04-25 23:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Glenice Y

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个实验要注意的细节很多,尤其是同源臂的设计长度,一般我是按照1:1加  这时候你要按照长度计算,加入量的确定,其实一般很少的量就可以了10ng这样子

发自小木虫Android客户端
3楼2023-04-25 23:56:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zljg8260

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 泡沫12 at 2023-04-25 23:16:04
A和B片段我一般overlap 30 bp,50ul体系各加200ng,不加引物,PCR 10个循环,之后取2ul做模板,各加1.5ul上下游引物,进行PCR

预反应的退火温度是根据重叠部分来吗

发自小木虫Android客户端
4楼2023-04-26 00:12:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-11 4/200 2026-03-11 20:01 by 清风月
[考研] 一志愿安徽大学材料工程专硕313分,求调剂的学校 +7 Yu先生 2026-03-10 9/450 2026-03-11 16:46 by 2020015
[考研] 材料与化工(0856)304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-10 9/450 2026-03-11 16:37 by @飒飒飒飒
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 081200计算机科学与技术数一英一306求调剂 +3 intankt 2026-03-08 3/150 2026-03-11 10:50 by dandan413
[考研] 306求调剂 +3 唐薏薏 2026-03-09 3/150 2026-03-10 22:30 by peike
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
[考研] 327分求调剂086 +4 西红柿?小帅 2026-03-09 7/350 2026-03-10 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 物理学求调剂 +4 sx宋 2026-03-05 4/200 2026-03-10 11:11 by changlu999
[考研] 0832食品科学与工程293调剂 +3 东东不東 2026-03-07 3/150 2026-03-09 15:58 by ls_13456
[考研] 313求调剂 +4 Yyt杨1 2026-03-07 5/250 2026-03-09 13:48 by macy2011
[考研] 求调剂 +3 拾柒12。 2026-03-08 3/150 2026-03-08 17:33 by bingxueer79
[考研] 085701环境工程专业,初试305,均过国家A区线 +7 卡卡来了@ 2026-03-07 8/400 2026-03-08 06:40 by 刘兵
[考研] 一志愿郑大071000分数282求调剂 +3 研研颜 2026-03-05 7/350 2026-03-07 22:33 by 帆船哥
[考研] 一志愿211 化学305分求调剂 +3 0703杨悦305分 2026-03-05 3/150 2026-03-07 21:15 by yinhuanshun
[考研] 308求调剂 +7 倘若起风了呢 2026-03-05 9/450 2026-03-06 22:59 by 倘若起风了呢
[考研] 哈尔滨理工大学2026年研究生调剂,材料科学与化学工程学院研究生调剂 +3 xinliu866 2026-03-06 3/150 2026-03-06 19:42 by 祁东原神
[考研] 复试调剂 +7 呼呼?~+123456 2026-03-05 10/500 2026-03-06 16:07 by @飒飒飒飒
[考研] 纺织、生物、化学、材料等专业 +3 Eember. 2026-03-05 7/350 2026-03-05 16:35 by Eember.
信息提示
请填处理意见