应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 大肠杆菌BL21 CrisprCas9基因敲除
31/1返回列表
查看: 1027  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者CipherLee将赠送您 10 个金币

CipherLee

新虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌BL21 CrisprCas9基因敲除

最近在用双质粒系统pCas和ptargetF做BL21的基因敲除，敲出效率非常低，一个半月只敲掉了一个基因，有大佬指点一下这个实验有什么需要注意的嘛，效率为什么这么低，敲不掉是常事，我的ptargetF都测序了 都构建成功的，pcas也是转进去了，其他就和大肠杆菌的常规操作一样了，为什么敲不掉呀

@biostar2009 发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2023-04-12 15:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄黑波波

新虫 (小有名气)
楼主如果是用dsDNA做同源交換的話建议上下游同源臂有500bp左右，而且加上抗性筛选的话就很明显，其他操作按照杨晟的文章应该是问题不大的，感受态浓度尽可能的浓，dsDNA也建议到300～1000ng/μl

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2023-04-12 19:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄黑波波

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄黑波波 at 2023-04-12 19:42:03
楼主如果是用dsDNA做同源交換的話建议上下游同源臂有500bp左右，而且加上抗性筛选的话就很明显，其他操作按照杨晟的文章应该是问题不大的，感受态浓度尽可能的浓，dsDNA也建议到300～1000ng/μl
...

当然若是同源交換的片段放在质粒上，敲除效率肯定比线性片段的好

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2023-04-12 19:44:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 CipherLee 的主题更新
31/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 招调剂 +9 帆船哥 2026-03-04 11/550 2026-03-06 01:45 by FSAzriel
[考研] 一志愿211，0860总分286食品工程专业求调剂 +4 林林Winnie 2026-03-05 4/200 2026-03-05 21:32 by zzpnuli111
[考研] 282求调剂 +7 夕～日 2026-03-05 8/400 2026-03-05 21:31 by zzpnuli111
[考研] 一志愿苏大材料工程专硕293求调剂 +3 钢铁大炮 2026-03-04 3/150 2026-03-05 21:07 by 黑衣馒头人
[考研] 085600材料与化工，一志愿广州985，求调剂 +8 qqyyaill 2026-03-05 8/400 2026-03-05 20:04 by houyaoxu
[考研] 材料调剂 +4 L9370 2026-03-05 4/200 2026-03-05 19:36 by caszguilin
[考研] 334求调剂 +3 Trying] 2026-03-03 4/200 2026-03-05 16:39 by zhukairuo
[考博] 申博 +3 添菜了哈 2026-03-04 5/250 2026-03-05 13:13 by 添菜了哈
[考研] 085600材料调剂 总分330 +5 池池丶 2026-03-03 5/250 2026-03-05 09:41 by oxidpl
[考研] 材料328求调剂 +10 一个萝卜02 2026-03-03 10/500 2026-03-05 09:31 by oxidpl
[考研] 293求调剂 +4 是乐渝哇 2026-03-03 4/200 2026-03-03 23:04 by zhukairuo
[考研] 085602化学工程350，调剂，有没有211的 +5 利好利好. 2026-03-02 9/450 2026-03-03 17:06 by 利好利好.
[考研] 材料270求调剂 6+6 Eiiiio 2026-03-01 11/550 2026-03-03 15:04 by Phoebelala
[考研] 一志愿中科大能动297求调剂，本科川大 +3 邵11 2026-03-03 3/150 2026-03-03 14:50 by 新能源达人
[考研] 11408，学硕276求调剂 +3 崔wj 2026-03-02 5/250 2026-03-02 22:14 by 255671
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +8 llx0610 2026-03-02 9/450 2026-03-02 22:09 by 无际的草原
[考研] 0856求调剂285 +11 吕仔龙 2026-02-28 11/550 2026-03-02 20:15 by hypershenger
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭